基础研究
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世界华人消化杂志. 2018-05-08; 26(13): 760-768
Published online 2018-05-08. doi: 10.11569/wcjd.v26.i13.760
HBx蛋白及其羧基末端缺失35个氨基酸的突变体对正常肝细胞增殖的影响
朱冉旭, 羊东晔, 司徒伟基
朱冉旭, 羊东晔, 司徒伟基, 香港大学深圳医院消化及肝病科 广东省深圳市 518053
朱冉旭, 博士, 主治医师, 主要从事乙型肝炎病毒对肝癌作用机制的相关方面研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 81702777; 广东省自然科学基金资助项目, No. 2015A030310053.
作者贡献分布: 此课题的研究, 数据和写作分析由朱冉旭完成; 论文修改由朱冉旭、羊东晔及司徒伟基完成.
通讯作者: 朱冉旭, 主治医师, 518053, 广东省深圳市福田区海园一路(白石路与侨城东路交汇), 香港大学深圳医院消化和肝脏科. zhurx@hku-szh.org
收稿日期: 2018-03-09
修回日期: 2018-04-17
接受日期: 2018-04-25
在线出版日期: 2018-05-08
Abstract
目的

构建野生型HBx(wild-type HBx, wt-HBx)和自然突变体HBx(truncated HBx, tHBxΔ35)重组慢病毒表达载体, 建立稳定转染细胞株, 观察wt-HBx和tHBxΔ35对肝细胞增殖和凋亡的影响.

方法

构建TOPO3.1- wt-HBx和TOPO3.1-tHBxΔ35重组慢病毒载体; 与3个质粒包装系统用磷酸钙方法共同转染到人293T细胞, 包装成病毒颗粒, 分别感染肝细胞LO2和MIHA, 并进行荧光和Western blot法检验细胞中wt-HBx和tHBxΔ35的表达情况. 用细胞计数, 细胞活力测定, 集落形成实验, 流式细胞仪等方法检测对肝细胞增殖和凋亡效应的影响.

结果

重组慢病毒载体及稳定转染细胞株构建成功, 转染后wt-HBx和tHBxΔ35在细胞中表达明显变化; tHBxΔ35过表达细胞的增殖速度明显高于wt-HBx组和CTRL对照组, 而感染wt-HBx组的肝细胞增殖速度比CTRL对照组和tHBxΔ35组增殖速度慢(P<0.05); tHBxΔ35可能通过促进细胞S期的合成而刺激细胞增殖, 而wt-HBx 可能通过捕获细胞的G0/G1期而抑制细胞增殖. 但tHBxΔ35, wt-HBx在肝细胞的凋亡率是很低的.

结论

HBx对肝细胞具有抑制增殖的作用, 而tHBxΔ35对肝细胞具有促进增殖的作用.

Keywords: 慢病毒载体; tHBxΔ35; HBx基因; 细胞增殖; 肝细胞; 凋亡

核心提要: 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)编码HBx蛋白在原发性肝癌发展中发挥重要的作用. 在肝癌组织中, HBx 羧基末端频繁易丢失35个氨基酸, 形成自然突变体HBx(truncated HBx, tHBxΔ35); 本研究主要探讨HBx和tHBxΔ35对正常肝细胞增殖的影响. 结果发现HBx对肝细胞具有抑制增殖的作用, 而tHBxΔ35对肝细胞具有促进增殖的作用.