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建立基于循环肿瘤细胞上的RNA原位杂交技术
周典蓉, 赵晓航, 南方医科大学第三临床医学院基础医学中心 广东省广州市 510515
李薇, 高佳佳, 鞠强, 赵朋月, 赵晓航, 中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院 分子肿瘤学国家重点实验室 北京市 100021
周典蓉, 主要从事消化肿瘤癌变机制的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, Nos. 81572365, 81372591; 国家高技术发展计划"863"基金资助项目, No. 2012AA020206.
作者贡献分布: 本课题由赵晓航设计; 研究过程由周典蓉、高佳佳、鞠强、赵朋月及李薇操作完成; 数据分析由周典蓉与鞠强完成; 论文起草由周典蓉与李薇完成; 文章修改和审阅由赵晓航完成.
通讯作者: 赵晓航, 教授, 100021, 北京市朝阳区潘家园南里17号, 中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院, 分子肿瘤学国家重点实验室. zhaoxh@cicams.ac.cn
电话: 010-67709015 传真: 010-87778360
收稿日期: 2015-12-31
修回日期: 2016-02-18
接受日期: 2016-02-22
在线出版日期: 2016-03-28
修回日期: 2016-02-18
接受日期: 2016-02-22
在线出版日期: 2016-03-28
Abstract
目的: 循环肿瘤细胞(circulating tumor cell, CTC)是一种重要的体液生物标志, 通过检测CTC的数量及其表型可以动态了解肿瘤进展. 本研究建立一种基于CTC细胞滴片上的RNA原位杂交方法, 分析CTC表型间接了解肿瘤进展.
方法: 采用负性富集技术获得肝细胞肝癌患者外周血CTC等有核细胞的细胞滴片, 并在CTC滴片上尝试建立RNA原位杂交技术. 选择真核生物高度保守的肽基脯氨酰顺反异构酶B(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase B, PPIB)基因作为阳性对照, 合成针对PPIB基因高灵敏度的RNA杂交探针, 并在实体肿瘤患者外周血CTC滴片中检测PPIB基因的转录活性.
结果: 用于外周血有核细胞负性富集的多种试剂, 均不影响在CTC滴片上的RNA原位杂交, 最终优化了对传统CTC滴片细胞的固定方式和固定时间, 实现了在负性富集的肝细胞肝癌CTC滴片上的PPIB基因原位RNA杂交, 获得了CTC细胞中PPIB基因转录信息, 建立了实时动态监测实体肿瘤患者外周血CTC中特定基因转录活性的方法.
结论: 缩短采血到固定细胞的时间以减少RNA降解, 通过高灵敏探针的RNA原位杂交可以实现对CTC中特定基因转录水平的实时监测.
Keywords: 循环肿瘤细胞; 负性富集; RNA原位杂交
核心提示: 本研究结合负性富集外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cell, CTC)和新的高精度RNA原位杂交方法, 优化了富集过程中细胞固定的条件, 避免RNA降解, 成功建立了基于肝细胞肝癌外周血CTC滴片上RNA原位杂交技术.