临床研究
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世界华人消化杂志. 2015-07-08; 23(19): 3029-3037
Published online 2015-07-08. doi: 10.11569/wcjd.v23.i19.3029
乙型肝炎相关性肝癌中Toll样受体4调控周期蛋白依赖激酶4/6对其增殖的影响
周勇, 黄文峰, 冯潜, 石世代, 李恩亮, 李科浩, 吴荣寿, 邬林泉
周勇, 冯潜, 石世代, 李恩亮, 李科浩, 吴荣寿, 邬林泉, 南昌大学第二附属医院肝胆外科 江西省南昌市 330006
周勇, 黄文峰, 萍乡市人民医院普外科 江西省萍乡市 337055
周勇, 主要从事肝胆胰脾疾病的诊治研究.
作者贡献分布: 此课题由周勇、黄文峰及邬林泉共同设计; 实验过程由周勇、冯潜、李恩亮、李科浩、吴荣寿及石世代完成; 数据分析由周勇完成; 论文撰写由周勇、黄文峰及邬林泉完成.
通讯作者: 邬林泉, 教授, 主任医师, 330006, 江西省南昌市民德路1号, 南昌大学第二附属医院肝胆外科. wulqnc@163.com
电话: 0791-86300249
收稿日期: 2015-04-05
修回日期: 2015-04-29
接受日期: 2015-05-08
在线出版日期: 2015-07-08
Abstract

目的: 探讨Toll样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)对乙型肝炎相关性肝癌细胞增殖的影响及作用机制.

方法: Western blot法检测36例乙型肝炎相关性肝癌患者组织及相应癌旁组织中TLR4、周期蛋白依赖激酶(cyclin-dependent kinase, CDK)4和CDK6的蛋白表达水平, 并分析癌组织中TLR4与CDK4、CDK6之间的关联性. 构建3个特定干扰TLR4的siRNA序列和一个阴性对照序列, 通过脂质体转染肝癌细胞Hep-3B, Western blot法筛选出最佳干扰序列. Western blot法检测转染前后肝癌细胞中TLR4、CDK4和CDK6的蛋白表达水平; MTT比色法、平板克隆形成实验检测干扰TLR4表达后肝癌细胞增殖能力.

结果: 在乙型肝炎相关性肝癌患者组织中, TLR4、CDK4和CDK6蛋白的总体表达水平高于相应癌旁组织(P<0.05), 且TLR4分别与CDK4、CDK6的表达呈正相关性(r1 = 0.66, r2 = 0.57). 成功构建并筛选出最佳干扰序列TLR4-siRNA-03. 转染TLR4-siRNA-03后, 与Control组相比, TLR4-siRNA组中CDK4、CDK6蛋白表达均随之降低(P<0.05), 肝癌细胞Hep-3B的生长速度也明显下降(P<0.05), TLR4-siRNA组克隆形成率(18.77%±4.61%)也明显下降(P<0.05).

结论: 在乙型肝炎相关性肝癌中TLR4可能通过调控CDK4、CDK6来影响其增殖.

Keywords: Toll样受体4; 周期蛋白依赖激酶4; 周期蛋白依赖激酶6; 乙型肝炎相关性肝癌; 增殖

核心提示: Toll样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)基因在人类多种肿瘤中呈过表达、在肝癌中TLR4调控周期蛋白依赖激酶4/6(cyclin-dependent kinase 4/6, CDK4/6)的表达影响肝癌细胞增殖的研究目前未见报道, 本实验在组织和细胞水平探讨TLR4调控CDK4/6的表达对乙型肝炎相关性肝癌细胞增殖的影响.