研究快报
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世界华人消化杂志. 2013-08-08; 21(22): 2192-2197
Published online 2013-08-08. doi: 10.11569/wcjd.v21.i22.2192
抗TNFα单链抗体复制缺陷型腺病毒载体的构建及表达
卓萌, 唐余燕, 余永胜, 周丽芹, 潘庆春, 王鹏, 臧国庆, 汤正好
卓萌, 唐余燕, 余永胜, 周丽芹, 潘庆春, 王鹏, 臧国庆, 汤正好, 上海交通大学附属第六人民医院感染病科 上海市 200233
卓萌, 硕士, 主要从事病毒性肝炎的基础与临床研究.
基金项目: 上海市科委医学引导类基金资助项目, No. 114119a1200.
作者贡献分布: 实验设计及论文修改由汤正好完成; 研究过程由卓萌操作, 唐余燕与周丽芹协助完成; 本实验由臧国庆、余永胜、潘庆春及王鹏指导完成; 本论文写作由卓萌完成.
通讯作者: 汤正好, 主任医师, 博士生导师, 200233, 上海市宜山路600号, 上海交通大学附属上海市第六人民医院感染病科. tzhhao@163.com
电话: 021-64369181-58673
收稿日期: 2013-04-07
修回日期: 2013-05-27
接受日期: 2013-07-03
在线出版日期: 2013-08-08
Abstract

目的: 构建pAd/CMV/V5-DEST-TNFα-scFv重组腺病毒载体, 通过病毒包装、纯化及滴定, 获得高纯度高感染性的病毒液, 并对TNFα-scFv进行表达、鉴定.

方法: 以携带TNFα-scFv基因的载体PUC57-Amp为模板, 扩增TNFα-scFv目的基因, 构建穿梭质粒pDONR221-TNFα-scFv, 测序证实质粒含有目的基因. 与骨架质粒pAd-CMV-V5-DEST腺病毒骨架载体进行同源重组, 形成表达克隆pAd/CMV/V5-DEST-TNFα-scFv. 表达克隆转染293细胞, 包装重组腺病毒, 并鉴定和病毒滴定.

结果: TNFα-scFv基因成功克隆到腺病毒载体中, 转染293细胞后成功包装出重组腺病毒, 病毒滴度为2.5×1011 TCID 50/mL, Western blot检测到TNFα-scFv基因在293细胞中高水平表达.

结论: 成功构建了带有TNFα-scFv基因的重组腺病毒载体, 为进一步研究提供实验基础.

Keywords: 肿瘤坏死因子α; 抗TNFα单链抗体; 复制缺陷型腺病毒载体

核心提示: 以TNFα为核心的炎症反应, 在重型肝炎患者肝细胞继发性损伤中的作用早已引起人们高度重视. 近年来, scFv已越来越多地被研究和应用于医学的各个领域, 为多种疾病的诊断、治疗和预防提供基础. 本研究成功构建pAd/CMV/V5-DEST-TNFα-scFv重组腺病毒, 可在一定程度上阻止TNFα引起的重型肝炎, 旨在为重型肝炎的治疗提供一种新的方法和实验基础.