修回日期: 2010-01-06
接受日期: 2010-01-11
在线出版日期: 2010-02-18
目的: 探讨零下非结冰保存肝细胞的效果及其与细胞凋亡的关系.
方法: UW液保存的C3A细胞悬液分为3组: -0.8 ℃组(零下非结冰组), 0 ℃组(0 ℃非结冰组), 4 ℃组(对照组). 低温保存24、48及72 h后, 采用流式细胞术分别测定细胞存活率及凋亡率, 同时测定LDH、乳酸释放, 细胞内ATP含量、尿素合成功能及白蛋白分泌功能, 同时观察细胞形态.
结果: 零下非结冰组较0 ℃非结冰组及对照组明显提高了低温保存72 h的C3A细胞的存活率(86.49%±2.80% vs 81.50%±2.83%, 77.83%±3.40%, 均P<0.05), 降低了细胞凋亡率(1.26%±0.84% vs 5.34%±1.20%, 9.16%±1.99%, 均P<0.05); 明显抑制了低温保存72 h乳酸以及LDH释放(乳酸: 10.38 μg/106 cells±1.40 μg/106 cells vs 12.02 μg/106 cells±1.64 μg/106 cells, 17.41 μg/106 cells±2.40 μg/106 cells; LDH: 80.10 U/L±11.10 U/L vs 120.04 U/L±14.32 U/L, 148.98 U/L±15.37 U/L, 均P<0.05); 更好地维持了低温保存72 h C3A细胞内ATP含量、尿素合成功能、及白蛋白分泌功能(均P<0.05). 形态上, 零下非结冰组保存细胞死亡比例少, 细胞接触良好, 未见对照组及0 ℃非结冰组细胞膜周围出现"毛刺"样改变及细胞内的"空泡样"改变.
结论: 在零下非结冰条件下保存肝细胞, 建立一个"血库样"(ready to use)肝细胞库, 可以有效促进生物人工肝的发展.