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世界华人消化杂志. 2009-10-08; 17(28): 2877-2880
Published online 2009-10-08. doi: 10.11569/wcjd.v17.i28.2877
Published online 2009-10-08. doi: 10.11569/wcjd.v17.i28.2877
痘苗病毒辅助的重组丙型肝炎病毒生产体系中生产细胞的选择
舒文, 马强, 董慧敏, 林冠峰, 吴英松, 南方医科大学抗体工程研究所 广东省广州市 510515
舒文, 南方医科大学在读硕士, 主要从事丙型肝炎病毒体外大规模培养技术的研究平台的建立及疫苗的实验室研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30872244.
作者贡献分布: 实验设计由吴英松与舒文完成; 研究过程由舒文与林冠峰完成; 数据整理, 统计分析及文章写作由舒文完成; 马强指导实验; 文章审阅由马强与吴英松完成; 实验试剂准备由董慧敏完成.
通讯作者: 吴英松, 教授, 510515, 广东省广州市, 南方医科大学抗体工程研究所. wg@fimmu.com
电话: 020-61648321
收稿日期: 2009-06-20
修回日期: 2009-08-27
接受日期: 2009-09-07
在线出版日期: 2009-10-08
修回日期: 2009-08-27
接受日期: 2009-09-07
在线出版日期: 2009-10-08
Abstract
目的: 探讨痘苗病毒辅助的重组丙型肝炎病毒制备体系中生产细胞的选择.
方法: 将已构建好的质粒pT7HCV及pVHCV分别共转染BHK21, HepG2, SMMC7721细胞株, 4 h后用痘苗病毒感染细胞, 96 h后用RT-PCR检测HCV的RNA表达, 用荧光定量PCR方法检测培养上清中RNA的拷贝数, 并用Western blot检测结构蛋白E2以及非结构蛋白NS5的表达.
结果: RT-PCR检测到各细胞株培养上清中均有HCV的RNA的存在, 定量PCR显示RNA的拷贝数在BHK21, HepG2, SMMC7721细胞中的产量分别为(2.97±0.28)×107, (1.99±0.17)×105, (1.19±0.17)×105(copies/mL). Western blot检测到在这3种生产细胞中均有HCV非结构蛋白NS5的表达.
结论: BHK21, HepG2, SMMC7721细胞株均可生产出重组丙型肝炎病毒颗粒, 且以BHK21为生产细胞株时产量最高.
Keywords: 重组丙型肝炎病毒; 痘苗病毒; 荧光定量聚合酶链式反应