临床研究
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世界华人消化杂志. 2009-09-18; 17(26): 2686-2691
Published online 2009-09-18. doi: 10.11569/wcjd.v17.i26.2686
利用RNA干扰技术抑制糖调节蛋白78在大肠癌细胞系中的表达
邢晓明, 李玉军, 刘芳
邢晓明, 李玉军, 青岛大学医学院附属医院病理科 山东省青岛市 266003
刘芳, 青岛市城阳区人民医院病理科 山东省青岛市 266000
邢晓明, 副主任医师, 医学博士, 主要从事消化系肿瘤分子病理学研究.
基金项目: 山东省优秀中青年科学家奖励基金资助项目, No. 2006BSB 14001.
作者贡献分布: 邢晓明、李玉军及刘芳对此文所作贡献均等; 此课题由邢晓明酝酿并设计并获得研究经费; 研究过程及数据分析由刘芳完成; 本论文写作由邢晓明、李玉军及刘芳完成; 李玉军对文章的知识性内容作批评性审阅、指导.
通讯作者: 邢晓明, 副主任医师, 266003, 山东省青岛市, 青岛大学医学院附属医院病理科. edithxing@hotmail.com
电话: 0532-82911532
收稿日期: 2009-07-17
修回日期: 2009-09-07
接受日期: 2009-09-15
在线出版日期: 2009-09-18
Abstract

目的: 观察靶向shRNA质粒表达载体(PGPU6/GFP/Neo-GRP78)对大肠癌RKO细胞系GRP78 mRNA及蛋白的作用.

方法: 采用免疫组织化学及半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测结直肠腺癌、腺瘤及正常黏膜组织中GRP78的表达; 使用脂质体2000将GRP78靶向shRNA质粒表达载体(PGPU6/GFP/Neo-GRP78)转染至RKO细胞内, 应用RT-PCR与Western blot法检测GRP78基因及蛋白的表达.

结果: GRP78在结直肠癌组织中的表达水平显著高于正常黏膜组织(9.470±0.754 vs 0.780±2.468, Z = -8.140, P<0.05), 腺瘤组织中其表达水平高于正常黏膜组织而低于癌组织, 差别有统计学意义(5.330±2.744 vs 1.000±0.840, 9.560±2.093, 均P<0.05). 然而在mRAN水平上, GRP78在3种组织中的表达无统计学意义; 靶向shRNA质粒表达载体PGPU6/GFP/Neo-GRP78能明显抑制RKO细胞中GRP78蛋白及mRNA的表达(F = 11.670, 271.860, 均P<0.05).

结论: 靶向shRNA质粒表达载体(PGPU6/GFP/Neo-GRP78)能明显抑制RKO细胞GRP78 mRNA及蛋白的表达, 为进一步明确GRP78在结直肠腺癌细胞增殖动力学中的作用奠定了实验基础.

Keywords: 结直肠癌; 糖调节蛋白78; RNA干扰