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世界华人消化杂志. 2009-04-18; 17(11): 1085-1090
Published online 2009-04-18. doi: 10.11569/wcjd.v17.i11.1085
Published online 2009-04-18. doi: 10.11569/wcjd.v17.i11.1085
Survivin启动子介导自杀基因与突变体融合基因真核表达载体的构建
孙萍胡, 吴云林, 董文杰, 乔敏敏, 朱黎明, 涂水平, 上海交通大学附属瑞金医院消化科 上海市 200025
孙萍胡, 上海交通大学附属瑞金医院消化科在读博士, 主要从事消化系肿瘤的基础和临床研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30772518.
作者贡献分布: 此课题由涂水平设计; 研究过程孙萍胡、董文杰、乔敏敏及朱黎明操作完成; 数据分析由及本论文写作由孙萍胡、吴云林及涂水平完成.
通讯作者: 涂水平, 副主任医师, 200025, 上海市瑞金二路197号, 上海交通大学附属瑞金医院消化科. tushuiping@yahoo.com
电话: 021-64370045-661144
收稿日期: 2008-12-31
修回日期: 2009-03-10
接受日期: 2009-03-23
在线出版日期: 2009-04-18
修回日期: 2009-03-10
接受日期: 2009-03-23
在线出版日期: 2009-04-18
Abstract
目的: 构建Survivin启动子介导自杀基因胞嘧啶脱氨酶(CD)与Survivin Cys84Ala突变体(SurMut)融合基因的重组腺相关病毒质粒(pAM/SurP-CDglySurMut), 探讨其在肿瘤细胞中有效表达融合基因的能力.
方法: PCR扩增E.coli CD基因和带有甘氨酸(gly)连接体的Survivin突变体片段, 亚克隆至具有Survivin启动子的腺相关病毒载体pAM/SurP, 获得重组表达载体pAM/SurP-CDglySurMut. 重组载体瞬时转染胃癌细胞, Western blot检测融合蛋白的表达.
结果: 经PCR扩增成功克隆E.coli CD基因和带有gly连接体的Survivin突变体片段. 重组阳性克隆经限制性酶切鉴定和基因测序, 证实目的基因CDglySurMut已正确插入pAM/SurP载体中. Western blot证实Survivin启动子能够驱动CDglySurMut融合基因在胃癌细胞中表达.
结论: pAM/SurP-CDglySurMut载体能够在肿瘤细胞中表达融合蛋白, 为进一步探讨其靶向治疗肿瘤奠定了实验基础.
Keywords: Survivin启动子; Survivin突变体; 胞嘧啶脱氨酶基因; 载体构建