血管内皮生长因子165基因对人胃癌细胞在体外生长及其受体表达的影响

Abstract

目的: 将已构建的重组腺病毒Ad-VEGF₁₆₅进行扩增和纯化并观察其对人胃腺癌细胞(BGC-823)在体外生长及其受体表达的影响.

方法: 以人胚肾293细胞对重组腺病毒Ad-VEGF₁₆₅和对照病毒Ad-GFP进行包装、扩增后感染BGC-823细胞, 应用MTT比色法分析VEGF₁₆₅对该种细胞体外生长的影响, 并以免疫细胞化学方法检测该种细胞VEGFR-2的表达情况.

结果: 成功扩增及纯化了重组腺病毒Ad-VEGF₁₆₅及对照病毒Ad-GFP, 获得约3.2×10¹³ pfu/L滴度的重组腺病毒和2.0×10¹³ pfu/L滴度的对照病毒. 当感染复数(MOI)为20时转导率即接近100%而无明显细胞中毒现象. MTT结果显示Ad-VEGF₁₆₅组吸光度明显高于Ad-GFP组(24 h: 0.960±0.01 vs 0.737±0.01, P<0.01; 48 h: 1.321±0.03 vs 0.981±0.02, P<0.01; 72 h: 1.663±0.03 vs 1.207±0.01, P<0.01)及对照组(24 h: 0.960±0.01 vs 0.724±0.03, P<0.01; 48 h: 1.321±0.03 vs 0.968±0.01, P<0.01; 72 h: 1.663±0.03 vs 1.185±0.02, P<0.01). 另外, 在该细胞株上检测到了VEGFR-2的表达, 且在Ad-VEGF₁₆₅组其表达明显高于Ad-GFP组(62.5% vs 37.6%, P<0.01)和对照组(62.5% vs 34.1%, P<0.01).

结论: VEGF对胃癌细胞有直接的促生长作用, 并可上调其主要受体VEGFR-2的表达水平, 从而进一步证实了VEGF对胃癌细胞的自分泌作用.

Keywords: 腺病毒; 血管内皮生长因子; 胃癌; 增殖; VEGFR-2