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世界华人消化杂志. 2007-12-08; 15(34): 3572-3576
Published online 2007-12-08. doi: 10.11569/wcjd.v15.i34.3572
Published online 2007-12-08. doi: 10.11569/wcjd.v15.i34.3572
RNA干扰阻断cyclin D1表达抑制结肠癌细胞增殖
丁健, 王承党, 吴婷, 福建医科大学附属第一医院消化内科 福建省福州市 350002
李丹, 王小众, 福建医科大学附属协和医院消化内科 福建省福州市 350001
于皆平, 武汉大学人民医院消化内科 湖北省武汉市 430060
丁健, 2005年武汉大学医学院医学博士研究生毕业, 主治医师, 主要从事消化道肿瘤的基因治疗研究.
基金项目: 福建省科技厅青年人才创新基金赞助项目, No. 2006F3035; 福建省卫生厅青年基金赞助项, No. 2006-1-10.
通讯作者: 丁健, 350002, 福建省福州市茶中路,福建医科大学附属第一医院消化内科. docdingjian@yahoo.com.cn
电话: 0591-88808826
收稿日期: 2007-08-23
修回日期: 2007-11-28
接受日期: 2007-11-28
在线出版日期: 2007-12-08
修回日期: 2007-11-28
接受日期: 2007-11-28
在线出版日期: 2007-12-08
Abstract
目的: 使用RNA干扰技术阻断人结肠癌细胞cyclin D1的表达, 检测其对细胞生长增殖的影响和机制.
方法: 将人结肠癌细胞株HT-29分成3组, antisense组(转染反义链组)、sense组(转染正义链组)和对照组. 免疫沉淀和蛋白质印迹法观察cyclin D1 siRNA对细胞cyclin D1蛋白质表达的影响, 并对蛋白质电泳图像进行分析, MTT比色法绘制细胞生长曲线, 3H-TdR技术和流式细胞技术观测细胞周期变化.
结果: 反义siRNA有效抑制了cyclin D1蛋白质表达, MTT实验显示, 转染反义siRNA的细胞, 生长代谢减慢, 与对照组细胞差异显著(P<0.01). 而antisense组细胞24 h的3H-TdR渗入量, G0/G1期和S期细胞较对照组和sense组明显减少(3H-TdR: 1181.8±117.97 vs 1798.4±55.36, 1851.4±83.46; P<0.01; G0/G1期: 79.31% vs 60.87%, 59.14%; S期: 13.67% vs 26.42%, 27.93%; P<0.01).
结论: RNA干扰技术能有效减弱cyclin D1蛋白质表达, 使细胞周期受阻, 并抑制结肠癌细胞的生长增殖.
Keywords: 小干扰RNA; 结肠癌; cyclin D1; 细胞周期; 细胞增殖; MTT比色法; 流式细胞技术