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世界华人消化杂志. 2007-07-28; 15(21): 2284-2289
Published online 2007-07-28. doi: 10.11569/wcjd.v15.i21.2284
Published online 2007-07-28. doi: 10.11569/wcjd.v15.i21.2284
结肠特异性基因RELMβ的克隆及其真核表达载体构建
郑丽端, 杨秀萍, 华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科 湖北省武汉市 430022
童强松, 吕清, 华中科技大学同济医学院附属协和医院外科 湖北省武汉市 430022
董继华, 华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室 湖北省武汉市 430022
郑丽端, 医学博士, 主治医师, 主要从事消化系统疾病的分子病理研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30600278.
通讯作者: 童强松, 430022, 湖北省武汉市, 华中科技大学同济医学院附属协和医院外科. qs_tong@hotmail.com
电话: 027-85726129
收稿日期: 2007-03-18
修回日期: 2007-07-24
接受日期: 2007-07-28
在线出版日期: 2007-07-28
修回日期: 2007-07-24
接受日期: 2007-07-28
在线出版日期: 2007-07-28
Abstract
目的: 观察克隆小鼠结肠特异性基因RELMβ, 并构建其真核表达载体.
方法: 采用Western blot、Northern blot方法检测RELMβ基因在小鼠不同脏器中的表达; 从小鼠结肠组织中提取总RNA, 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增RELMβ全长cDNA, 克隆至T载体后进行核酸序列分析, 并将其正向插入到真核表达载体pcDNA3.1/Zeo(+)的限制性内切酶位点EcoRⅠ; 重组子在阳离子脂质体Lipofectamine 2000的介导下瞬时转染小鼠胚胎纤维母细胞NIH/3T3、结肠癌细胞系CT26, Western blot及RT-PCR法检测细胞RELMβ表达水平.
结果: RELMβ mRNA和蛋白特异表达于小鼠结肠, 而其他脏器未见表达. 成功克隆了小鼠RELMβ全长cDNA(318 bp), 与已报道序列的同源性高达99%, 获得GenBank登录号DQ157777. 真核表达载体pcDNA3.1-RELMβ转染细胞后, 细胞内RELMβ mRNA和蛋白水平均显著增高(P<0.01).
结论: 从小鼠结肠组织中克隆出RELMβ特异性表达基因, 为深入研究RELMβ基因的生物学作用及其在结肠疾病靶向治疗中的作用奠定了基础.
Keywords: RELMβ基因; 组织特异性; 结肠; 基因表达; 免疫印迹; 逆转录聚合酶链反应