Published online 2007-04-28. doi: 10.11569/wcjd.v15.i12.1331
修回日期: 2007-02-02
接受日期: 2007-02-09
在线出版日期: 2007-04-28
目的: 研究趋化性细胞因子受体CXCR4短干扰RNA (siRNA)对大肠癌细胞系体外侵袭及增殖能力的影响.
方法: 利用T7 RNA聚合酶体外合成以CXCR4为靶基因的siRNA, 用脂质体转染大肠癌SW480细胞, 同时设立空白对照组和无关对照组. 于转染后48 h采用RT-PCR方法检测CXCR4 mRNA水平, 免疫印迹方法检测CXCR4和MT1-MMP的蛋白质水平, Boyden小室模型检测体外侵袭能力的变化, 流式细胞术检测细胞周期的分布情况, MTT法测定细胞增殖状况.
结果: SW480细胞转染CXCR4 siRNA 48 h后, 与空白对照和无关对照相比, CXCR4 mRNA水平明显下调(51.53%±6.1% vs 78.4%±3.3%, P<0.01; 51.53%±6.1% vs 87.4%±5.3%, P<0.01), CXCR4的蛋白质水平明显降低(47.3%±3.7% vs 107.2%±3.6%, P<0.01; 47.3%±3.7% vs 114.7%±4.8%, P<0.01), MT1-MMP蛋白表达水平也明显下降(43.8%±2.5% vs 64.4%±4.4%, P<0.01; 43.8%±2.5% vs 67.0%±2.9%, P<0.01), 细胞的体外侵袭能力减弱(26.5%±6.1% vs 73.7%±3.4%, P<0.01; 26.5%±6.1% vs 64.5%±5.7%, P<0.01), 细胞周期的分布无明显差异. 在无SDF-1存在的情况下, 各组细胞的增殖无明显改变; 经SDF-1刺激后, 各组细胞增殖增加, 但CXCR4 siRNA转染组细胞的增殖显著低于空白对照组和无关对照组(24 h: 0.55±0.03 vs 0.68±0.06, 0.71±0.04, P<0.05; 48 h: 0.67±0.04 vs 0.89±0.03, 0.94±0.07, P<0.05; 72 h: 0.72±0.06 vs 1.36±0.08, 1.53±0.07, P<0.01). 以上各指标在空白对照和无关对照之间无显著性差异(P>0.05).
结论: 以CXCR4为靶向的siRNA能够有效下调CXCR4基因, 降低SDF-1诱导的大肠癌细胞系体外侵袭能力及增殖活性.