基础研究
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世界华人消化杂志. 2006-01-18; 14(2): 158-162
Published online 2006-01-18. doi: 10.11569/wcjd.v14.i2.158
大肠杆菌表面 CS3 菌毛展示随机肽库的构建
刘向昕, 袁盛凌, 展德文, 郑继平, 刘纯杰, 王芃, 王令春, 张兆山
刘向昕, 袁盛凌, 展德文, 郑继平, 刘纯杰, 王芃, 王令春, 张兆山, 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 北京市 100071
刘向昕, 女, 1974-07-07生, 山西省太原市人 汉族, 2004年中国人民解放军军事医学科学院博士生, 主要从事基因工程疫苗研究.
基金项目: 国家高技术研究发展863计划项目, No.2004AA215212.
通讯作者: 张兆山, 100071, 北京丰台区东大街20号, 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所. zhangzs@nic.bmi.ac.cn
电话: 010-63834140 传真: 010-63833521
收稿日期: 2005-11-08
修回日期: 2005-12-01
接受日期: 2005-12-08
在线出版日期: 2006-01-18
Abstract

目的: 在肠毒素性大肠杆菌CS3菌毛表面构建10肽随机肽库.

方法: 首先将原有的单酶切CS3菌毛呈现载体改造为双酶切载体, 并证实改造后的载体能正确形成CS3菌毛. 同时设计合成2条寡核苷酸序列, 链1含有1个10肽随机编码序列(NNS)10, 链2可与链1的3'端互补. 两条链经过退火、延伸、酶切和回收与经过同样酶切的呈现载体连接, 连接产物纯化后分多次电击转化, 获得随机肽库. 随机挑选10个克隆进行测序并对测序结果进行分析.

结果: 获得1个库容量为1.8×106大小的随机肽库. 测序结果显示, 所构建肽库的基本框架与预期设计相符, 4个寡核苷酸出现的频率也与理论值相接近.

结论: 在肠毒素性大肠杆菌CS3菌毛表面成功构建库容量为1.8×106大小的10肽随机肽库. 为下一步利用肽库进行筛选奠定了基础.

Keywords: CS3菌毛; 细菌表面展示; 随机肽库