基础研究
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世界华人消化杂志. 2005-09-15; 13(17): 2098-2102
Published online 2005-09-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i17.2098
低氧对胰腺癌细胞株PC-3中IAP-2表达的影响机制
赵秋, 谷华, 杜静, 覃华, 刘南植
赵秋, 谷华, 杜静, 覃华, 刘南植, 华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科 湖北省武汉市 430030
赵秋, 男, 1963-09-01生, 湖北省黄冈市人, 汉族, 1985年同济医科大学本科毕业, 1988年同济医科大学硕士, 副主任医师, 主要从事消化系胰腺病学研究.
通讯作者: 赵秋, 430030, 湖北省武汉市汉口解放大道1095号, 华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科. tongji461@sina.com
电话: 027-83663611
收稿日期: 2005-06-28
修回日期: 2005-07-01
接受日期: 2005-07-08
在线出版日期: 2005-09-15
Abstract

目的: 研究极度低氧下人胰腺癌细胞株PC-3中IAP-2表达的变化, 初步探讨其与HIF-1的相关机制.

方法: PC-3细胞株分组孵育: 常氧组, 体积分数为20 mL/L O2/50 mL/L CO2/930 mL/L N2低氧组4 h, 950 mL/L N2/50 mL/L CO2极度低氧组1、3、5 h, 950 mL/L N2/50 mL/L CO2低氧3 h后复氧, 另取一组加入300 μmol/L氯化钴常氧孵育. 用细胞免疫化学定性检测IAP-2蛋白表达; 蛋白裂解液提取胞质胞核蛋白, 用Western blot检测IAP-2蛋白水平变化, 同时对比HIF-1蛋白表达; 用RT-PCR检测IAP-2基因水平改变.

结果: 免疫细胞化学检测IAP-2蛋白在PC-3细胞中呈阳性表达, 定位于胞质. Western blot显示常氧、低氧4h可检测到IAP-2蛋白,表达无差异, 极度低氧1 h IAP-2蛋白表达明显增加(t = 3.300, P<0.05), 3、5 h IAP-2持续高表达, 各时间段无显著性差异, 复氧后恢复基线水平. 实验还显示了HIF-1和IAP-2蛋白的表达差异: 常氧组HIF-1未表达, 低氧4 h可诱发, IAP-2保持基线水平; 极度低氧HIF-1无变化, IAP-2表达明显增高; 复氧后HIF-1不表达, IAP-2恢复基线表达; 加入氯化钴后HIF-1恢复表达, IAP-2保持基线, 初步表明IAP-2蛋白表达上调有独立于HIF-1的作用机制. RT-PCR检测表明, 极度低氧1、3、5 h后IAP-2mRNA表达明显高于常氧组（t = 6.900, P<0.05）, 各时间组无显著差异, 复氧后恢复基线水平. 该结果与上述IAP-2蛋白表达上调一致,初步表明IAP-2上调发生在转录水平.

结论: 极度低氧下IAP-2在人胰腺癌细胞株PC-3表达上调, 并具有独立于HIF-1的抗凋亡机制.

Keywords: 低氧; 胰腺癌; 凋亡抑制蛋白2; 缺氧诱导因子1