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乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因10的克隆化研究
成军, 刘妍, 洪源, 王琳, 钟彦伟, 董菁, 王刚, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市 100039
成军, 男, 1963-08-17生, 山东省淄博市人, 汉族. 1986年毕业于第一军医大学军医系, 获医学学士学位, 1989年毕业于军医进修学院, 获传染病学硕士学位, 1994年毕业于北京医科大学, 获传染病学博士学位, 1994-11-17/1997-12-01在美国得克萨斯大学健康科学中心临床免疫与传染病科完成博士后研究, 教授, 主任医师. 现任中华医学会传染病与寄生虫病学分会副主任委员、中华医学会热带病与寄生虫病学分会全国常委、全军医学科学技术委员会传染病与寄生虫病学会委员. 目前从事传染病特别是病毒性肝炎的临床医疗工作和基础研究工作, 学术研究方向是肝炎病毒与肝细胞相互作用的分子生物学机制, 已出版专著5部, 发表论文及综述300篇.
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目 , No. C03011402, No.C30070689 ; 军队"九、五"科技攻关项目 , No. 98D063 ; 军队回国留学人员启动基金项目 , No. 98H038 ; 军队"十、五"科技攻关青年基金项目 , No. 01Q138 ; 军队"十、五"科技攻关面上项目 , No. 01MB135 .
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-6693-3391 传真: 010-6380-1283
收稿日期: 2003-01-11
修回日期: 2003-02-20
接受日期: 2003-03-21
在线出版日期: 2003-07-15
修回日期: 2003-02-20
接受日期: 2003-03-21
在线出版日期: 2003-07-15
Abstract
目的
乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)是一种具有反式激活作用的病毒蛋白质. 为了探索HBxAg蛋白反式激活作用新的靶基因, 利用基因芯片技术(DNA chips)对于表达和不表达HBxAg的HepG2细胞的基因表达谱进行比较, 以期发现HBxAg蛋白反式激活作用的新靶点, 为阐明HBxAg的反式激活作用分子生物学机制, 以及HBV相关的肝细胞癌(HCC)形成的分子生物学机制开辟新的研究方向.
方法
以含有2拷贝头尾连接的HBV DNA的质粒pCP10作为模板, 根据ayw亚型的HBV DNA序列设计、合成引物, PCR扩增产物克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)中, 转染肝母细胞瘤细胞系HepG2, 提取RNA并进行逆转录. 进行基因芯片技术分析. 以生物信息学技术, 克隆、鉴定新基因.
结果
在16种HBxAg上调的靶基因中, 其中包括未知功能基因, 利用生物信息学技术, 获得HBxAg蛋白反式激活作用的新型靶基因, 开放读码框架(ORF)长度为1206个核苷酸(nt), 编码产物由401个氨基酸残基(aa)组成, 命名为XTP10.
结论
HBxAg是一种具有反式激活作用的蛋白. 基因芯片技术是进行基因表达谱分析的可靠、有效技术. 分子克隆技术结合生物信息学技术, 是目前鉴定、克隆未知功能新基因的有效技术途径.
Keywords: N/A