基础研究
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世界华人消化杂志. 2021-04-08; 29(7): 332-339
Published online 2021-04-08. doi: 10.11569/wcjd.v29.i7.332
敲除Linc00152对丝裂霉素耐药胃癌细胞NCI-N87/MMC的化疗耐药性影响及机制
吴明东, 叶洁桐, 朱蓓蕾, 叶芳敏, 汪望月
吴明东, 叶洁桐, 朱蓓蕾, 叶芳敏, 丽水市人民医院药学部 浙江省丽水市 323000
吴明东, 主要从事消化系统疾病相关的临床药学研究.
汪望月, 浙江省人民医院消化内科 浙江省杭州市 310000
基金项目: 丽水市公益性技术应用研究计划项目, No. 2019SJZC47.
作者贡献分布: 此课题由吴明东与汪望月设计; 研究过程由吴明东和叶洁桐操作完成; 研究所用试剂由吴明东和汪望月提供; 数据分析由朱蓓蕾和叶芳敏完成; 本论文写作由吴明东和汪望月完成.
通讯作者: 汪望月, 主任医师, 310000, 浙江省杭州市下城区上塘路158号浙江省人民医院消化内科. wangwangyue2544@aliyun.com
收稿日期: 2021-01-18
修回日期: 2021-02-08
接受日期: 2021-03-15
在线出版日期: 2021-04-08
Abstract
背景

长基因间非编码RNA 152(long intergenic noncoding RNA 152, Linc00152)在胃癌组织中高表达, 且其能促进胃癌细胞增殖、迁移与侵袭, 而Linc00152对胃癌化疗耐药的影响和机制并不清楚.

目的

探究Linc00152对人胃癌细胞系NCI-N87化疗耐药性的影响及相关的作用机制.

方法

实时定量荧光聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction, Real-time PCR)检测人胃癌细胞系NCI-N87及其丝裂霉素(mitomycin, MMC)耐药细胞系NCI-N87/MMC中Linc00152的表达情况. 采用小分子RNA干扰技术敲除NCI-N87/MMC中Linc00152的表达后, MTT法检测细胞对MMC和顺铂的敏感性, 流式细胞术检测细胞凋亡, Western Blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2, Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cysteine aspartic acid proteinase 3, caspase3)和劈裂的caspase3(cleaved-caspase3)的蛋白表达水平. 此外, Real-time PCR和Western blot检测多药耐药蛋白1/P-糖蛋白(multidrug resistant protein 1/P-glycoprotein, MDR1/P-gp)、层粘连蛋白受体1前体抗原(P37-kDa laminin receptor-1 precursor antigen, Mgr1-Ag)以及多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein, MRP)的表达.

结果

NCI-N87/MMC细胞中Linc00152的表达水平明显高于其亲本细胞NCI-N87. 在NCI-N87/MMC细胞中, 敲除Linc00152可诱导细胞凋亡, 并增加其对MMC和顺铂的敏感性. 敲除Linc00152可抑制NCI-N87/MMC细胞中Bcl-2蛋白表达, 促进Bax蛋白表达和caspase 3的活化. 此外, 敲除Linc00152还可下调NCI-N87/MMC细胞中多药耐药基因MDR1、Mgr1-Ag、MRP及其编码的蛋白的表达.

结论

下调NCI-N87/MMC细胞中Linc00152的表达可提高细胞对MMC和顺铂的敏感性, 其机制可能与调控细胞凋亡相关因子促进凋亡, 同时下调细胞中多药耐药基因MDR1、Mgr1-Ag及MRP的表达有关.

Keywords: Linc00152; 胃癌; NCI-N87细胞; 丝裂霉素耐药; 细胞凋亡

核心提要: 长基因间非编码RNA 152(long intergenic noncoding RNA 152, Linc00152)在丝裂霉素(mitomycin, MMC)耐药胃癌细胞系NCI-N87/MMC中高表达. 敲除Linc00152可提高NCI-N87/MMC细胞对MMC和顺铂的敏感性.