基础研究
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世界华人消化杂志. 2019-11-28; 27(22): 1356-1364
Published online 2019-11-28. doi: 10.11569/wcjd.v27.i22.1356
LincRNA-p21调控PI3K/AKT信号通路逆转结肠癌细胞伊立替康耐药性
戴丹平, 余灵芝, 叶梦飞
戴丹平, 余灵芝, 叶梦飞, 台州恩泽医疗中心(集团)台州医院药剂科 浙江省台州市 317000
戴丹平, 主管药师, 主要从事临床药学和基础药理方面的研究.
作者贡献分布: 此课题由戴丹平设计; 研究过程由戴丹平与余灵芝操作完成; 试剂由戴丹平提供; 数据分析由戴丹平与叶梦飞完成; 论文撰写由戴丹平完成.
通讯作者: 戴丹平, 主管药师, 浙江省台州市临海市西门街150号, 台州恩泽医疗中心(集团)台州医院药剂科. zhangyanyyhha@163.com
电话: 0576-85131150
收稿日期: 2019-10-22
修回日期: 2019-11-14
接受日期: 2019-11-20
在线出版日期: 2019-11-28
Abstract
背景

伊立替康(camptothecin-11, CPT-11)为晚期结肠癌的一线化疗用药, 但CPT-11耐药性限制了CPT-11的化疗效果. 研究结肠癌CPT-11耐药的机制, 并恢复结肠癌细胞对CPT-11的敏感性, 对延长结肠癌患者的生命时间具有十分重要的临床价值.

目的

探讨长链基因间非编码RNA-p21(long intergenic non-coding RNA-p21, lincRNA-p21)对结肠癌细胞CPT-11耐药的作用和机制.

方法

采用结肠癌HCT-8细胞和SW480细胞利用CPT-11持续接触浓度递增法分别构建伊立替康耐药HCT-8/CPT-11细胞和SW480/CPT-11细胞, 并利用实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测细胞内lincRNA-p21表达. HCT-8/CPT-11细胞和SW480/CPT-11细胞分别转染pcDNA-lincRNA-p21或si-lincRNA-p21后, 细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8, CCK-8)实验检测CPT-11对细胞活性的影响; 蛋白质免疫印迹(Western blot)初步分析了lincRNA-p21对磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B, PI3K/AKT)通路是否有调节作用. 采用PI3K/AKT通路抑制剂LY294002预处理已转染si-lincRNA-p21的HCT-8/CPT-11细胞和SW480/CPT-11细胞或采用PI3K/AKT通路激动剂Recilisib预处理已转染pcDNA-lincRNA-p21的HCT-8/CPT-11细胞和SW480/CPT-11细胞, CCK-8实验检测CPT-11对细胞活性的影响.

结果

与亲本细胞相比, CPT-11耐药细胞中lincRNA-p21表达明显降低. 过表达lincRNA-p21抑制HCT-8/CPT-11细胞和SW480/CPT-11细胞对CPT-11耐药性, 而敲低lincRNA-p21增强HCT-8/CPT-11细胞和SW480/CPT-11细胞对CPT-11耐药性. Western blot结果显示, lincRNA-p21过表达抑制PI3K/AKT通路活性; 而敲低lincRNA-p21增强PI3K/AKT通路活性. LY294002能抑制lincRNA-p21敲低对CPT-11耐药的促进作用; Recilisib能抑制lincRNA-p21过表达对CPT-11耐药的抑制作用.

结论

上调lincRNA-p21能抑制结肠癌细胞CPT-11耐药性, 而下调lincRNA-p21能增强结肠癌细胞CPT-11耐药性, 这种调节作用可能与lincRNA-p21调控PI3K/AKT信号通路活性相关.

Keywords: 长链基因间非编码RNA-p21; 结肠癌; 伊立替康; PI3K/AKT; 耐药

核心提要: lincRNA-p21在HCT-8/CPT-11和SW480/CPT-11细胞中低表达. 过表达lincRNA-p21能部分逆转HCT-8/CPT-11和SW480/CPT-11细胞的CPT-11耐药性并伴随抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B活性; 敲减lincRNA-p21以上指标呈相反结果.