基础研究
Copyright ©The Author(s) 2019. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2019-11-08; 27(21): 1304-1312
Published online 2019-11-08. doi: 10.11569/wcjd.v27.i21.1304
长链非编码RNA SNHG14通过靶向miR-144-3p调控胃癌细胞增殖和凋亡的体外实验研究
李昊天, 裴效瑞, 李洪涛, 郝明利
李昊天, 裴效瑞, 李洪涛, 郝明利, 天津市泰达医院普外科 天津市 300457
李昊天, 副主任医师, 研究方向为乳腺胃肠.
作者贡献分布: 此课题由李昊天、裴效瑞、李洪涛和郝明利设计; 研究过程由李昊天、裴效瑞、李洪涛和郝明利操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由李昊天与裴效瑞提供; 数据分析由李昊天、裴效瑞、李洪涛和郝明利完成; 本论文写作由李昊天完成.
通讯作者: 李昊天, 副主任医师, 300457, 天津市经济技术开发区第三大街65号, 天津市泰达医院普外科. sxfix5@163.com
收稿日期: 2019-09-02
修回日期: 2019-10-09
接受日期: 2019-10-16
在线出版日期: 2019-11-08
Abstract
背景

长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA, LncRNA)与胃癌发生发展密切相关, LncRNA SNHG14在肿瘤发生过程中发挥癌基因作用, 但其在胃癌中的作用机制尚未阐明. starBase预测显示miR-144-3p可能是SNHG14的靶基因, 但SNHG14是否可通过调控miR-144-3p的表达而参与胃癌发生过程尚未可知.

目的

探讨LncRNA SNHG14是否可通过靶向miR-144-3p调控胃癌细胞增殖与凋亡.

方法

实时荧光定量聚合酶链反应检测人胃黏膜上皮正常细胞与胃癌细胞中SNHG14与miR-144-3p的表达情况. 体外培养人胃癌MGC-803细胞, 随机分为5组: 空白(NC)组、阴性对照(si-con)组、SNHG14小干扰RNA(si-SNHG14)组、SNHG14小干扰RNA+miR-144-3p阴性对照(si-SNHG14+anti-miR-con)组、SNHG14小干扰RNA+miR-144-3p特异性寡核苷酸抑制剂(si-SNHG14+anti-miR-144-3p)组. 甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)法检测各组细胞的增殖情况; 流式细胞术检测各组细胞凋亡率; 双荧光素酶报告系统验证SNHG14与miR-144-3p的靶向调节关系. 蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中细胞周期蛋白1(cyclinD1)、B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)、p21、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein, Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、磷脂酰肌醇激酶(phosphoinositide 3-kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B, AKT) 信号通路相关蛋白表达.

结果

SNHG14在胃癌细胞中的表达水平显著高于胃黏膜上皮正常细胞(P<0.05), 而miR-144-3p的表达水平显著降低(P<0.05); 与NC组、si-con组比较, si-SNHG14组MGC-803细胞OD值显著降低(P<0.05), 细胞凋亡率显著增高(P<0.05), cyclinD1、Bcl-2、 PI3K的磷酸化(p-PI3K)、AKT的磷酸化(p-AKT)蛋白表达显著降低(P<0.05), p21、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.05); 双荧光素酶报告基因显示SNHG14可靶向结合miR-144-3p, 并可负向调控miR-144-3p的表达与活性; 干扰miR-144-3p可部分逆转沉默SNHG14对胃癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT信号通路的作用.

结论

SNHG14能够通过靶向结合并下调miR-144-3p的表达促进胃癌细胞增殖, 抑制细胞凋亡, 其可能通过激活PI3K/AKT信号通路而发挥作用.

Keywords: LncRNA SNHG14; miR-144-3p; 胃癌; 增殖; 凋亡

核心提要: 长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA, LncRNA)在肿瘤中可能发挥抑癌或促癌作用, LncRNA SNHG14在肿瘤中发挥癌基因作用, 但其在胃癌发生过程中的分子机制尚未完全阐明. 本研究拟寻找LncRNA SNHG14下游调控基因, 并探讨其可能作用机制, 为揭示LncRNA SNHG14在胃癌中的调控网络提供新方向.