VEGF在二甲双胍诱导HepG2细胞凋亡的作用

Abstract

目的

初步探讨二甲双胍(metformin, MET)诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的分子机制.

方法

将不同浓度的MET(0-20 mmol/L)作用于HepG2细胞24 h或10 mmol/LMET作用于HepG2细胞不同时间(0-48 h), 采用MTT法测定MET抑制细胞增殖效应. 将HepG2细胞暴露于不同浓度的MET(0-20 mmol/L)作用24 h或10 mmol/L MET不同时间(0-48 h), 用Annexin V-FITC/PI流式双染来测定其细胞凋亡率; 用RT-PCR检测不同浓度MET作用于HepG2细胞或相同浓度作用于HepG2细胞不同时间后血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表达的变化, 以了解MET诱导HepG2细胞凋亡与VEGF的关系.

结果

MET对HepG2细胞生长有明显的抑制作用. 不同浓度MET(0、5、10、15、20 mmol/L)处理HepG2细胞24 h后, 其相对细胞活力分别为100%、80.56%±0.72%、71.06%±0.70%、64.73%±0.35%、54.73%±0.40%, 呈现浓度依赖性; 10 mmol/L MET作用于HepG2细胞0、12、24、36、48 h后, 其相对相对细胞活力分别为100%、83.40%±0.70%、69.86%±0.45%、60.40%±0.88%、50.70%±0.45%, 呈现时间依赖性. 不同浓度MET(0、5、10、15、20 mmol/L)处理HepG2细胞24 h后, Annexin V-FITC/PI流式双染提示细胞凋亡明显增加, 其凋亡率分别为2.78%±0.68%、9.33%±0.22%、17.13%±0.10%、21.61%±0.20%、25.26%±1.09%, 呈现浓度依赖性; 10 mmol/LMET作用于HepG2细胞12、24、36、48 h后, Annexin V-FITC/PI流式双染提示细胞凋亡明显增加, 其凋亡率分别为2.05%±0.04%、8.10%±0.08%、16.53%±0.93%、20.95%±0.16%、25.65%±0.44%, 呈现时间依赖性. 随着MET浓度的升高或作用时间延长, VEGF的表达均减少, 呈现剂量或时间依赖性.

结论

二甲双胍可以通过诱导HepG2细胞凋亡来抑制其增殖, 其过程可能与抑制VEGF的表达有关.

Keywords: 二甲双胍; 凋亡; HepG2细胞; 血管内皮生长因子

核心提要: 二甲双胍可以减少多种恶性肿瘤的发生及肿瘤相关性死亡已得广泛证实. 本文通过体外实验证实二甲双胍可以诱导HepG2细胞凋亡, 对未来肝癌的治疗提供新思路.