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过表达CD44v6基因对人大肠癌SW480细胞侵袭迁移能力的影响
吕林, 刘海光, 张筱骅, 温州医科大学附属第一医院肿瘤外科 浙江省温州市 325000
吕林, 在读硕士, 主要从事肿瘤干细胞的研究.
基金项目: 温州市科技局基金资助项目, No. Y20140713; 温州医科大学附属第一医院科研孵化基金资助项目, No. FHY2014013.
作者贡献分布: 此课题由张筱骅设计与指导; 研究过程由吕林操作完成; 数据分析及论文撰写由吕林与刘海光完成.
通讯作者: 张筱骅, 教授, 主任医师, 博士生导师, 325000, 浙江省温州市瓯海区南白象街道, 温州医科大学附属第一医院肿瘤外科. zhangxhoncology@163.com
电话: 0577-55579462
收稿日期: 2015-12-20
修回日期: 2016-01-29
接受日期: 2016-01-31
在线出版日期: 2016-03-18
修回日期: 2016-01-29
接受日期: 2016-01-31
在线出版日期: 2016-03-18
Abstract
目的: 研究CD44v6基因过表达对SW480细胞侵袭和迁移能力的影响.
方法: 慢病毒介导的CD44v6过表达细胞(CD44v6组)和空载体对照细胞(NC组)由前期实验构建. 采用荧光显微镜观察增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)表达、实时荧光定量PCR检测CD44v6 mRNA表达水平、免疫荧光检测Flag标签蛋白三种方法重新鉴定过表达细胞模型; CCK-8法检测细胞增殖活性; 划痕试验和Transwell试验检测细胞侵袭和迁移能力.
结果: 绿色荧光蛋白观察显示细胞转染效率近100%; 实时荧光定量PCR显示CD44v6组细胞CD44v6 mRNA表达水平较对照组显著升高(P<0.001); Flag标签蛋白免疫荧光染色显示过表达CD44v6蛋白主要定位于细胞膜. CCK-8结果显示2组细胞增殖无明显差异; 划痕试验结果显示CD44v6组细胞划痕愈合指数较对照组显著增高(P<0.05); Transwell试验结果显示CD44v6组细胞迁移和侵袭相关指数均较对照组显著增高(均P<0.05), 且CD44v6抗体处理后, CD44v6组细胞迁移和侵袭相关指数均较前显著减低(均P<0.05).
结论: CD44v6基因过表达能显著增强SW480细胞侵袭和迁移能力.
Keywords: 大肠癌; 侵袭; 转移; CD44v6; 过表达
核心提示: 本研究采用慢病毒介导基因过表达技术, 成功建立CD44v6稳定过表达SW480细胞, 通过划痕试验和Transwell试验证实CD44v6过表达可显著增强细胞侵袭和迁移能力.