修回日期: 2014-12-14
接受日期: 2014-12-18
在线出版日期: 2015-01-28
目的: 研究结肠癌干细胞的肿瘤形成价值及其可能的临床价值.
方法: 对结肠癌干细胞进行无血清培养, 以流式细胞仪检测CD133和CD44表达, 以5-氟尿嘧啶(5-flurouracil, 5-Fu)处理结肠癌干细胞并观察其增殖抑制, 对结肠癌干细胞进行动物实验以确定其成瘤特征.
结果: Hoechest33342染色后, HT-29干细胞相对于HT-29细胞有明显的核拒染现象; 流式细胞仪发现HT-29细胞CD133阳性表达比率为44.6%, CD44阳性表达比率为0.6%; 而经过培养提纯后的HT-29干细胞CD133阳性表达比率为92.6%, CD44阳性表达比率为97.8%, CD133与CD44阳性表达比率显著提高; HT-29干细胞相对于HT-29细胞对5-Fu有明显的耐药作用, HT-29细胞IC50值为1.394 µg/mL, HT-29干细胞的IC50值为13.087 µg/mL, IC50值有明显的增高在恢复血清培养后, 体外增殖活性明显增强; HT-29干细胞体内生长速度比HT-29细胞体内生长速度显著要缓慢, HT-29细胞的肿瘤体积是HT-29干细胞肿瘤体积的两倍多; HT-29干细胞在小鼠富血管区(腋下和腹股沟淋巴结)的生长速率比皮下生长速率有明显的提高, 但与HT-29细胞的生长速率还有明显差距.
结论: 在结肠癌细胞株存在结肠癌干细胞, 通过无血清培养能分离出具有干细胞特征的结肠癌干细胞株, 结肠癌干细胞对5-Fu具有耐药性, 在适当微环境下其能快速生长, 转化为成熟的结肠癌细胞, 提示了改变结肠癌干细胞微环境可能是防止肿瘤复发的一个途径.
核心提示: 通过对结肠癌干细胞进行无血清培养, 以流式细胞仪检测CD133以及CD44的表达, 以5-氟尿嘧啶(5-flurouracil)进行处理结肠癌干细胞并观察其增殖抑制, 对结肠癌干细胞进行动物实验以确定其成瘤特征. 通过鉴定肿瘤干细胞, 寻找到调节肿瘤干细胞生物行为的因子, 将会给临床肿瘤的治疗起到巨大的推动作用.