基础研究
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世界华人消化杂志. 2014-02-18; 22(5): 624-629
Published online 2014-02-18. doi: 10.11569/wcjd.v22.i5.624
结肠癌中相关miRNA对NRP2调控的预测及鉴定
李明, 连海峰, 刘成霞, 马锋振, 谢书阳
李明, 连海峰, 刘成霞, 马锋振, 滨州医学院附属医院消化内科 山东省滨州市 256603
谢书阳, 滨州医学院肿瘤分子生物学重点实验室 山东省烟台市 264003
李明, 在读硕士, 主要从事大肠癌淋巴结转移的研究.
基金项目: 山东省自然科学基金资助项目, No. ZR2010HL051.
作者贡献分布: 李明与连海峰对此论文所作贡献均等; 此课题由刘成霞与连海峰设计; 研究过程由李明与连海峰操作完成; 数据分析由马锋振与谢书阳完成; 本论文写作由李明与连海峰完成.
通讯作者: 刘成霞, 教授, 256603, 山东省滨州市黄河二路661号, 滨州医学院附属医院消化内科. phdlcx@163.com
电话: 0543-3256764
收稿日期: 2013-11-20
修回日期: 2013-12-08
接受日期: 2013-12-15
在线出版日期: 2014-02-18
Abstract

目的: 预测可能调控神经纤毛蛋白2(neuropilin-2, NRP2)的微小RNA(microRNA, miRNA), 鉴定其对NRP2的调控作用及可能的调控机制.

方法: 使用生物信息学软件预测可能调控NRP2的miRNA, 选择可能性最大的miRNA-486-5p进一步研究, 构建miRNA-486-5p过表达质粒, 采用脂质体法将质粒转染入人结肠癌细胞株SW620, 实时定量PCR(qRT-PCR)验证miRNA-486-5p的表达丰度, Western blot检测NRP2的表达, 双荧光素酶实验验证miRNA-486-5p对NRP2的调控机制.

结果: 生物信息学技术预测共有25条miRNA可能调控NRP2的表达, 结合文献选择miR-486-5p进一步研究; miR-486-5p过表达质粒转染SW620细胞后, 表达丰度升高, NRP2蛋白表达明显下调, 双荧光素酶实验证实miRNA-486-5p可与NRP2 mRNA 3'非转录区(3' untranslated region, 3'UTR)直接结合, 从而发挥对NRP2转录后翻译的抑制作用.

结论: miRNA-486-5p可调控的NRP2的表达, 其作用机制是通过结合NRP2 3'UTR而抑制NRP2 mRNA的正常翻译.

Keywords: NRP2; miRNA-486-5p; 转染; 生物信息学技术

核心提示: 本研究应用生物信息学软件预测可能调控神经纤毛蛋白2(neuropilin-2, NRP2)的微小RNA, 选择可能性最大的miRNA-486-5p进一步研究, 上调SW620细胞miRNA-486-5p的表达量后, Western blot表明miR-486-5p可抑制NRP2的表达, 双荧光素酶实验证实miRNA-486-5p可与NRP2 mRNA 3'非转录区直接结合, 从而发挥对NRP2转录后翻译的抑制作用.