修回日期: 2013-12-05
接受日期: 2013-12-15
在线出版日期: 2014-02-08
目的: 研究P162是否通过抑制细胞周期检测点激酶(checkpoint kinase, Chk)1/2的表达来增加食管癌细胞株Eca109放射敏感性, 并观察其对细胞周期的影响.
方法: 以食管癌细胞株Eca109为研究对象, 小剂量反复照射形成有一定放射抗拒性的细胞株Eca109R; 将实验分为不加P162不照射组、不加P162照射组、加P162不照射组及加P162照射组四大组, 每组分别包含Eca109与Eca109R二种细胞株; MTT法选取实验合适的照射剂量; CCK-8法测定实验所需的最适P162浓度; Western blot检测4组细胞中Chk1与Chk2蛋白表达的动态变化; 流式细胞仪检测4组细胞的细胞周期变化.
结果: 成功诱导具有放射抗拒性的食管癌细胞株Eca109R; 6 Gy为实验照射剂量; 以20 mg/L的P162为实验浓度; Western blot显示Eca109及Eca109R均存在少量的Chk1及Chk2蛋白, 照射后Chk1与Chk2的表达增高, 加用20 mg/L P162培养48 h后, Eca109中Chk1与Chk2值分别为0.244±0.013、0.148±0.011, 6 Gy照射后24 h其值分别为0.154±0.013、0.124±0.011; Eca109R中Chk1与Chk2值分别为0.139±0.010、0.134±0.008, 6 Gy照射后24 h其值分别为0.083±0.010、0.059±0.009, 照射后二者表达均明显降低(P<0.05); 细胞周期显示, 加用P162不照射组的G2期较不加药组下降, 加药照射组较不加药照射组G2期显著下降(P<0.05).
结论: Eca109R更有放射抗拒性. P162通过抑制Chk1、Chk2的表达来解除细胞G2/M期阻滞, 增加食管癌细胞株Eca109放射敏感性.
核心提示: P162可能通过干预G3BP(Ras-GTPase-activating protein SH3 domain binding protein)功能, 使抑癌基因p53活性增加, 抑制了ATM、ATR通路激活, 进而抑制细胞周期检测点激酶(checkpoint kinase, Chk)1、Chk2的表达来抑制细胞DNA损伤修复, 消除照射后G2期的阻滞, 使G2期未修复的细胞进入M期, 增加食管癌的放射敏感性.