基础研究
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世界华人消化杂志. 2014-10-08; 22(28): 4217-4222
Published online 2014-10-08. doi: 10.11569/wcjd.v22.i28.4217
人miR-155真核过表达载体的构建及其对HepG2.2.15细胞中HBeAg的抑制效应
蔡启茵, 任广立, 张卫云, 马恒灏
蔡启茵, 任广立, 马恒灏, 中国人民解放军广州军区广州总医院儿科 广东省广州市 510010
蔡启茵, 广州中医药大学研究生院 广东省广州市 510405
张卫云, 中国人民解放军广州军区广州总医院检验科 广东省广州市 510010
蔡启茵, 在读硕士, 主要从事儿科病毒感染性疾病的研究.
基金项目: 广州市科技计划基金资助项目, No. 2013J4100116.
作者贡献分布: 蔡启茵与任广立对此文所作贡献均等; 此课题设计由任广立与蔡启茵完成; 研究过程由蔡启茵与张卫云操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由任广立与张卫云提供; 数据分析及本论文写作由蔡启茵完成; 任广立与马恒灏修改校正.
通讯作者: 任广立, 教授, 副主任医师, 510010, 广东省广州市越秀区流花路111号, 中国人民解放军广州军区广州总医院儿科. guangliren@hotmail.com
电话: 020-88653521
收稿日期: 2014-07-21
修回日期: 2014-08-21
接受日期: 2014-08-26
在线出版日期: 2014-10-08
Abstract

目的: 构建人microRNA-155(miR-155)真核过表达载体, 并探讨其对HepG2.2.15细胞中乙型肝炎e抗原(hepatitis B e antigen, HBeAg)的抑制作用, 为研究其基因调控机制对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)复制及免疫状态影响提供实验基础.

方法: 以人肝癌细胞系HepG2.2.15细胞基因组为模板, 通过PCR扩增人miR-155前体序列, 酶切后连接到pmR-mCherry质粒, 构建pmiR-155真核过表达载体, 然后进行酶切和测序鉴定. 利用脂质体将pmiR-155转染HepG2.2.15细胞, 同时设空质粒(pmR-mCherry质粒)转染组和空白对照组. 转染24 h后荧光显微镜下观察细胞内Cherry表达, RT-PCR检测各组细胞内miR-155表达量以及ELISA法检测HBeAg分泌量的改变.

结果: 经测序证实, 成功构建人pmiR-155真核过表达载体. 转染细胞后进行应荧光观察, 载体中Cherry有较好的表达活性. RT-PCR表明, 与对照组细胞相比, pmiR-155组细胞内所表达的miR-155明显提高. ELISA结果示pmiR-155组细胞所分泌的HBeAg量显著低于空载组和空白组.

结论: 成功构建了人miR-155真核过表达载体; 转染HepG2.2.15细胞后表达稳定; 蛋白水平检测表明其可以抑制HepG2.2.15细胞中HBeAg的表达.

Keywords: 微小RNA; miR-155; 真核过表达载体; HepG2.2.15细胞

核心提示: 真核过表达载体pmiR-155转染HepG2.2.15细胞后, 过表达的miR-155可抑制HBeAg的分泌, 可能对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus)复制具有一定抑制作用.