基础研究
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世界华人消化杂志. 2014-08-28; 22(24): 3557-3564
Published online 2014-08-28. doi: 10.11569/wcjd.v22.i24.3557
幽门螺杆菌脂多糖作用于胃癌细胞后刺猬蛋白信号通路中相关蛋白Ptch-1、Gli的表达及意义
周慧, 张军, 张国新, 邰婷, 周晓颖, 苏静
周慧, 张军, 邰婷, 南京医科大学附属南京医院 南京市第一医院消化科 江苏省南京市 210006
张国新, 周晓颖, 苏静, 南京医科大学第一附属医院消化科 江苏省南京市 210029
作者贡献分布: 此课题由周慧、张军及张国新设计; 研究过程由周慧、张军、邰婷、周晓颖及苏静操作完成; 研究所用试剂与分析工具由张军与张国新提供; 数据分析由周慧与张军完成; 本论文写作由周慧与张军完成.
通讯作者: 张军, 副教授, 210006, 南京市秦淮区长乐路68号, 南京市第一医院808区消化科. zhangjun711028@126.com
收稿日期: 2014-05-10
修回日期: 2014-06-19
接受日期: 2014-07-01
在线出版日期: 2014-08-28
Abstract

目的: 通过用幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)、环巴胺(cyclopamine)分别或联合作用于胃癌细胞AGS后, 观察刺猬蛋白(sonic hedgehog, Shh)信号通路中相关蛋白Ptch-1、Gli的表达变化, 并探讨其意义.

方法: (1)不同浓度H. pylori LPS作用于AGS细胞24 h, Western blot检测Ptch-1、Gli的表达, 找到最佳刺激浓度. 以最佳刺激浓度分别作用于AGS细胞24、48、72 h, Western blot法检测Ptch-1、Gli的表达; (2)不同浓度环巴胺作用于AGS细胞24 h后, MTT法检测对AGS的抑制率, 求得半数抑制浓度(50% concentration of inhibition, IC50). 以环巴胺IC50作用AGS细胞24、48、72 h后, Western blot检测Ptch-1、Gli的表达; (3)AGS细胞培养后分3组, 分别用H. pylori LPS、环巴胺、H. pylori LPS+环巴胺作用AGS细胞24 h, 另设阴性对照组, 应用Western blot法对各组细胞中Shh信号通路相关蛋白Ptch-1、Gli的表达水平进行检测.

结果: 不同浓度H. pylori LPS作用于AGS细胞24 h后Ptch-1、Gli的表达升高, 且随着浓度增加, 表达逐渐增高(P<0.05), 最终达到一个平台期, 以平台期浓度作为最佳刺激浓度, 分别刺激AGS细胞24、48、72 h, Western blot结果显示, Ptch-1、Gli的表达逐渐升高, 呈时间依赖性(P<0.05); 不同浓度环巴胺作用于AGS细胞24 h后, MTT结果显示环巴胺对AGS的抑制作用呈浓度依赖性(P<0.05); 以环巴胺IC50作用AGS细胞24 h后, Western blot结果显示随着时间的延长, Gli的表达逐渐减低, 而Ptch-1的表达无显著性差异. H. pylori LPS、环巴胺、H. pylori LPS+环巴胺组分别作用于AGS细胞24 h后, H. pylori LPS+环巴胺联合作用组的Ptch-1表达高于对照组及环巴胺组(P<0.05), 而与H. pylori LPS组无统计学差异; H. pylori LPS+环巴胺联合作用组Gli的表达低于对照组和H. pylori LPS组(P<0.05), 与环巴胺组无统计学差异.

结论: H. pylori通过其毒力因子LPS能够影响胃癌细胞AGS的Shh信号通路相关蛋白的表达. 环巴胺可通过抑制Shh信号通路抑制胃癌细胞AGS的生长. H. pylori LPS可能通过影响Shh信号通路的上游分子发挥作用.

Keywords: 幽门螺杆菌; 脂多糖; 胃癌细胞; 刺猬蛋白; 环巴胺

核心提示: 通过用幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)、环巴胺分别或联合作用于胃癌细胞AGS后, 发现H. pylori LPS可能通过影响Shh信号通路的上游分子发挥作用, 环巴胺可抑制胃癌细胞生长.