研究快报
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世界华人消化杂志. 2014-06-28; 22(18): 2553-2558
Published online 2014-06-28. doi: 10.11569/wcjd.v22.i18.2553
SRPX2真核表达载体的构建及其在SW480细胞中的表达
刘揆亮, 周跃, 吴静
刘揆亮, 吴静, 首都医科大学附属北京世纪坛医院消化内科 北京市 100038
周跃, 兰州大学第一医院消化内科 甘肃省兰州市 730000
刘揆亮, 医师, 主要从事结直肠癌及其癌前病变的基础与临床研究.
基金项目: 北京市自然科学基金资助项目, No. 7133239; 北京市卫生系统高层次卫生技术人才培养计划基金资助项目, No. 2011-RC1.
作者贡献分布: 此课题由刘揆亮与吴静设计; 实验由刘揆亮与周跃完成; 文章由刘揆亮与吴静撰写.
通讯作者: 吴静, 教授, 主任医师, 100038, 北京市海淀区羊坊店铁医路10号, 首都医科大学附属北京世纪坛医院消化内科. wujing36@163.com
收稿日期: 2014-04-29
修回日期: 2014-05-09
接受日期: 2014-05-19
在线出版日期: 2014-06-28
Abstract

目的: 构建人含sushi重复蛋白X连锁2(sushi repeat-containing protein, X-linked 2, SRPX2)基因真核表达载体pcDNA3.1-SRPX2, 并在结肠癌细胞系SW480中瞬时表达.

方法: 采用逆转录PCR方法从人结直肠癌HCT116细胞总RNA中扩增出SRPX2 CDS区的cDNA片段, 先后与T载体pMD19及真核表达载体pcDNA3.1连接, 重组质粒经双酶切和测序鉴定无误后, 采用Lipofectamine 2000瞬时转染SW480细胞, 应用实时荧光定量PCR及免疫印迹法检测SRPX2 mRNA及蛋白的表达

水平.

结果: 成功构建真核表达载体pcDNA3.1-SRPX2, 测序和双酶切鉴定结果均正确, 载体能在SW480细胞中上调SRPX2 mRNA表达, 并正确表达SRPX2蛋白.

结论: 成功构建SRPX2真核表达载体, 为进一步研究SRPX2基因在结直肠癌中的功能奠定了基础.

Keywords: 含sushi重复蛋白X连锁2; 结直肠癌

核心提示: 本文成功的从HCT116细胞系调取了含sushi重复蛋白X连锁2(sushi repeat-containing protein, X-linked 2, SRPX2)基因, 构建了SRPX2真核表达载体, 并证实其可在SW480中上调SRPX2 mRNA水平, 并正确表达SRPX2蛋白, 为深入研究SRPX2在结肠癌中的功能做出了铺垫.