研究快报
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世界华人消化杂志. 2014-06-08; 22(16): 2277-2284
Published online 2014-06-08. doi: 10.11569/wcjd.v22.i16.2277
番木瓜种子提取物异硫氰酸苄酯对肝癌细胞凋亡的影响
朱明月, 李伟, 鲁琰, 蔡小妹, 董栩, 陈栘, 郭峻莉, 李孟森
朱明月, 海南大学农学院 海南省海口市 570228
朱明月, 李伟, 鲁琰, 董栩, 陈栘, 郭峻莉, 李孟森, 海南省肿瘤发生和干预重点实验室 海南医学院 海南省海口市 571199
朱明月, 李伟, 鲁琰, 董栩, 陈栘, 李孟森, 海南医学院分子生物学重点实验室 海南省海口市 571199
朱明月, 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 海南省海口市 571101
蔡小妹, 海南医学院基础医学院生物技术专业 海南省海口市 571199
朱明月, 助理研究员, 主要从事肿瘤分子生物学方面的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, Nos. 81360307, 81260306, 81160261, 31060164;教育部新世纪优秀人才支持计划基金资助项目, No. NCET-10-0124;教育部科学技术研究重点基金资助项目, No. 211146;海南省重点科技基金资助项目, No. DZXM20110038;海南省自然科学基金资助项目, Nos. 310044, 811208.
作者贡献分布: 朱明月负责异硫氰酸苄酯对肝癌细胞增殖的影响的检测、研究数据的分析及论文撰写; 李伟负责异硫氰酸苄酯对细胞凋亡形态学的观察; 鲁琰与蔡小妹负责细胞培养; 董栩与郭峻莉负责蛋白表达的检测; 陈栘负责Caspase3酶活性检测; 李孟森负责研究内容的设计、研究数据的分析以及论文的撰写与审校.
通讯作者: 李孟森, 教授, 571199, 海南省海口市龙华区学院路3号, 海南省肿瘤发生和干预重点实验室, 海南医学院分子生物学重点实验室. mengsenli@163.com
电话: 0898-66895322
收稿日期: 2014-02-10
修回日期: 2014-03-11
接受日期: 2014-04-24
在线出版日期: 2014-06-08
Abstract

目的: 通过异硫氰酸苄酯(benzyl-isothiocyanate, BITC)对体外培养的人肝癌细胞株HLE和Bel 7402的凋亡影响, 初步探讨BITC调控肝癌细胞凋亡的可能机制.

方法: 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)染色法检测不同浓度BITC对肝癌细胞增殖的影响; 选择具有抑制肝癌细胞生长的BITC浓度处理肝癌细胞后4,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐(DAPI)染色法进行凋亡的形态学观察; Caspase3酶活性检测试剂盒检测细胞中的Caspase3酶活性; Western blot法检测具代表性的凋亡相关蛋白Caspase8和Caspase3, 细胞周期相关蛋白Cyclin D1的表达.

结果: MTT结果显示BITC对人肝癌细胞的增殖有明显的抑制作用, 用浓度为40 µmol/L的BITC处理时, HLE和Bel 7402细胞存活率分别为71.56%和78.09%, 和对照组比较, 有统计学差异(P<0.05); 当用浓度为80 µmol/L的BITC处理时, HLE和Bel 7402生长率分别为32.91%和53.06%, 和对照组比较, 有统计学显著性差异(P<0.01); 经BITC处理后的细胞, DAPI染色显示细胞特征性凋亡变化; Western blot和Caspase活性检测结果显示, 随着BITC浓度增加, Caspase8和Caspase3蛋白表达水平及活性呈上升趋势, 而细胞周期蛋白Cyclin D1的表达则明显下降.

结论: BITC对人肝癌细胞增殖有抑制作用, 并能诱导肝癌细胞凋亡; BITC通过激活Caspase8和Caspase3信号途径以及抑制细胞周期进展诱导细胞凋亡.

Keywords: 肝癌细胞; 异硫氰酸苄酯; 细胞凋亡; 细胞周期

核心提示: 肝癌是常见的恶性肿瘤之一, 其恶性程度大, 死亡率很高, 目前没有良好的治疗方法, 寻找理想的化疗药物给肝癌的治疗带来新的希望. 目前研究已经发现, 番木瓜种子提取物-异硫氰酸苄酯(benzyl isothiocyanate, BITC)不仅具有预防肿瘤发生的作用, 而且还具有较好的抗肿瘤作用, 但其是否能抑制肝癌细胞增殖和诱导癌细胞凋亡的作用尚不清楚. 本研究证实BITC能够抑制肝癌细胞增殖和诱导癌细胞凋亡, 通过激活Caspases信号途径以及抑制细胞周期进展发挥其抑癌作用, 这为将来BITC应用于肝癌的临床治疗奠定了一定的基础.