基础研究
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世界华人消化杂志. 2014-05-28; 22(15): 2081-2090
Published online 2014-05-28. doi: 10.11569/wcjd.v22.i15.2081
Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白致敏的树突状细胞瘤苗对肝细胞癌瘤内CD25+Foxp3+ Treg细胞的影响
李日伦, 周爽, 秦杰, 梁春敏, 罗国容
李日伦, 罗国容, 广西医科大学组织胚胎学教研室 广西壮族自治区南宁市 530021
周爽, 秦杰, 梁春敏, 复旦大学上海医学院解剖与组织胚胎学系 上海市 200032
李日伦, 博士研究生, 讲师, 主要从事肿瘤分子生物学的研究.
基金项目: 国家自然科学基金青年基金资助项目, No. 30500280;国家自然科学基金面上基金资助项目, No. 30871312.
作者贡献分布: 李日伦、周爽、秦杰、梁春敏及罗国容对此文均有贡献; 此课题由李日伦在梁春敏与罗国容的指导下设计; 研究过程主要由李日伦操作完成并得到周爽与秦杰的协助; 研究所用试剂及资金主要由梁春敏提供; 数据分析由李日伦完成; 本论文写作由李日伦完成并得到罗国容与梁春敏的指导.
通讯作者: 罗国容, 教授, 530021, 广西壮族自治区南宁市双拥路22号, 广西医科大学组织胚胎学教研室. grongluo@yahoo.com
电话: 0771-5351365
收稿日期: 2014-03-11
修回日期: 2014-04-08
接受日期: 2014-04-18
在线出版日期: 2014-05-28
Abstract

目的: 观察注射Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白致敏的骨髓来源树突状细胞(bone marrow derived dendritic cells, BMDCs)瘤苗对小鼠肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)瘤内CD25+叉头盒转录因子P3(forkhead box p3, Foxp3)+调节T淋巴细胞(regulatory T cells, Tregs)浸润的影响.

方法: 在粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor, GM-CSF)和白介素-4(interleukin-4, IL-4)诱导下体外扩增BMDCs, 使用Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白体外致敏BMDCs制备瘤苗, 荧光免疫化学染色和FACS检测致敏前后BMDCs CD11c、CCR7、CD80和CD86的表达变化. 使用Hepal-6细胞皮下注射的方法制备小鼠(C57BL/6J)HCC模型, 成瘤小鼠分组注射Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白致敏的BMDCs瘤苗(足垫部和瘤内, 每7 d注射1次, 共2次), 并另设对照(空白对照组、BMDCs组和Hepal-6细胞裂解蛋白组). 在治疗结束后9 d获取组织标本, 免疫荧光组织化学染色和FACS检测瘤苗注射后肿瘤内CD8+ T细胞和CD25+ Foxp3+ Tregs细胞的浸润情况.

结果: 光镜和扫描电镜显示: GM-CSF和IL-4在体外诱导扩增的BMDCs具有树突状细胞特征性的形态特征, 且免疫细胞化学染色显示: 该细胞表达CD11c, CCR7, CD80和CD86. 使用Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白致敏的BMDCs组, 与对照组(BMDCs组和Hepal-6细胞裂解蛋白组)相比该组细胞CD11c(67.2±4.49 vs 52.4±5.20, 58.4±4.43, P<0.01), CCR7(65.4±5.34 vs 45.9±5.04, 57.0±3.46, P<0.01), CD80(62.9±4.69 vs 46.9±4.75, 54.4±3.47, P<0.01)和CD86(73.3±3.58 vs 60.1±2.98, 63.7±3.10, P<0.01)的表达均明显增高. 使用Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白致敏的BMDCs瘤苗为HCC荷瘤小鼠进行注射治疗, 治疗后的检测结果显示: 该组小鼠瘤内CD8+ T细胞的浸润明显高于对照组(空白对照组、BMDCs组和Hepal-6细胞裂解蛋白组)(55.0±4.11 vs 38.2±3.34, 44.6±4.29, 45.6±4.92, P<0.01), 而同时瘤内CD25+Foxp3+ Tregs细胞的浸润则明显低于相应对照组(0.37±0.028 vs 1.31±0.020, 0.77±0.057, 0.57±0.062, P<0.05).

结论: 使用Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白致敏的BMDCs瘤苗进行治疗, 可增强HCC小鼠瘤内CD8+ T细胞的浸润, 并同时减少CD25+ Foxp3+ Tregs细胞的浸润, 该瘤苗具有抗肿瘤免疫效果.

Keywords: Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白; 骨髓来源树突状细胞; CD8+ T细胞; CD25+Foxp3+ Treg细胞; 肝细胞癌

核心提示: 肿瘤免疫耐受是肿瘤免疫治疗的瓶颈, 而CD4+CD25+Foxp3+ T细胞在肿瘤内的浸润是构成瓶颈的关键因素之一. 尽管不同形式的抗原刺激DCs制备的疫苗有一定的抗肿瘤效应但效果不理想, 抗原的免疫原性是影响疫苗效果的关键因素之一. 本研究利用Hepal-6细胞热休克后的裂解蛋白结合了肿瘤细胞裂解蛋白全抗原性和热休克后免疫原性增强的优势, 在体外有较强致敏DCs成熟的作用, 在体内能活化和促进CD8+ T细胞迁移入肿瘤灶, 减少CD4+CD25+Foxp3+ T细胞在瘤内的浸润, 有较强的抗肿瘤效应.