研究快报
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世界华人消化杂志. 2013-11-08; 21(31): 3394-3399
Published online 2013-11-08. doi: 10.11569/wcjd.v21.i31.3394
干扰素-γ基因敲除小鼠慢性乙型肝炎病毒复制模型的建立
陈明发, 夏幼辰, 林永, 孙潺, 杨东亮, 吴珺
陈明发, 南昌大学第二附属医院感染性疾病科 江西省南昌市 330006
夏幼辰, 林永, 孙潺, 杨东亮, 吴珺, 华中科技大学同济医学院附属协和医院感染性疾病科 湖北省武汉市 430030
陈明发, 博士, 主要从事感染与免疫的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 81001313; 中国博士后基金资助项目, No. 20090460949.
作者贡献分布: 此课题由陈明发与吴珺设计; 吴珺与杨东亮对课题进行指导; 陈明发完成大部分实验与数据分析; 夏幼辰、林永及孙潺参与完成部分实验及作图; 本论文写作由陈明发与吴珺完成.
通讯作者: 吴珺, 博士后, 430030, 湖北省武汉市解放大道1277号, 华中科技大学同济医学院附属协和医院感染性疾病科. joeanjune327@yahoo.com
电话: 027-85726978
收稿日期: 2013-09-08
修回日期: 2013-09-27
接受日期: 2013-10-15
在线出版日期: 2013-11-08
Abstract

目的: 建立干扰素-γ(interferon-γ, IFN-γ)基因敲除小鼠慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)复制模型.

方法: IFN-γ基因敲除(IFN-γ-/-)小鼠繁育并抽提组织DNA进行聚合酶链反应(PCR)及凝胶电泳鉴定基因型. IFN-γ-/-小鼠纯合子9只与野生型C57BL/6小鼠9只同时高压水注射pAAV/HBV1.2质粒, 按既定时间点采血检测乙型肝炎表面抗原(hepatitis B virus surface antigen, HBsAg)、乙型肝炎e抗原(hepatitis B virus e antigen, HBeAg)和HBV DNA. 血清HBsAg和HBeAg表达水平由电化学发光法进行定量检测. 经抽提血清总DNA后, 血清HBV DNA由定量PCR进行检测.

结果: 本实验室繁殖的IFN-γ-/-小鼠均为纯合子基因型. IFN-γ-/-小鼠和野生型C57BL/6小鼠血清中HBsAg、HBeAg和HBV DNA持续存在, 转染后第40天仍阳性. 但是, IFN-γ-/-小鼠血清HBsAg表达水平高于C57BL/6野生小鼠(40天时, P = 0.042); IFN-γ-/-小鼠血清HBV DNA持续高水平复制, 明显高于C57BL/6野生小鼠(第25天时, P = 0.012; 第40天时, P = 0.039). 两组小鼠血清HBeAg表达水平无差异.

结论: IFN-γ-/-小鼠慢性HBV复制模型成功建立, 并揭示了IFN-γ在慢性HBV感染中可抑制HBV复制.

Keywords: IFN-γ; IFN-γ-/-小鼠; 慢性乙型肝炎; 动物模型

核心提示: 本研究成功建立了干扰素-γ(interferon-γ, IFN-γ)基因敲除小鼠乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)持续复制模型, 该模型小鼠血清病毒血症持续时间长, 而IFN-γ基因缺陷. 因此, 本研究揭示了IFN-γ是机体内一个非常重要的免疫调节和效应因子, 在HBV持续感染过程中都发挥着重要的抗HBV作用.