研究快报
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世界华人消化杂志. 2013-08-28; 21(24): 2424-2428
Published online 2013-08-28. doi: 10.11569/wcjd.v21.i24.2424
促肾上腺皮质激素释放因子对肠上皮细胞紧密连接相关蛋白的调节
杨丽, 郑鹏远, 刘志强
杨丽, 郑州人民医院消化内科 河南省郑州市 450003
郑鹏远, 刘志强, 郑州大学第二附属医院消化科 河南省郑州市 450003
杨丽, 副主任医师, 主要从事炎症性肠病的基础与临床研究.
作者贡献分布: 此课题由杨丽与郑鹏远设计; 研究过程由杨丽与刘志强完成; 数据分析由杨丽完成; 论文撰写由杨丽与郑鹏远完成.
通讯作者: 郑鹏远, 教授, 450003, 河南省郑州市经八路2号, 郑州大学第二附属医院消化科. medp7123@126.com
收稿日期: 2013-05-26
修回日期: 2013-07-22
接受日期: 2013-07-31
在线出版日期: 2013-08-28
Abstract

目的: 探讨促肾上腺皮质激素释放因子(corticotrophin-releasing factor, CRF)对肠上皮细胞紧密连接相关蛋白的调节作用.

方法: 以CRF(20 ng/mL)刺激HT-29细胞24 h后再以脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)(100 ng/mL)刺激24 h, 收集细胞, ELISA法检测细胞提取物中胞质附着蛋白(zonula occludins protein, ZO)-1、ZO-2、Occludin、cldn1、cldn2、cldn3和cldn4的表达. 再次将HT-29细胞以CRF 0、1、10、20 ng/mL的浓度刺激24 h和核因子κB(nuclear factor κB, NF-κB)抑制剂马来酸二乙酯(diethylmaleate, DEM)1 mmol/L预孵1 h后加CRF 20 ng/mL刺激24 h, 然后更换各组细胞液后继续再以LPS 100 ng/mL的浓度孵育24 h, 收集各组HT-29细胞, 提取蛋白, 免疫印迹法检测cldn2表达水平.

结果: ELISA检测结果显示以CRF刺激结肠上皮细胞24 h后再以LPS刺激后ZO-1、ZO-2、Occludin、cldn1和cldn3表达水平较单纯LPS刺激有轻度的下降, 但是cldn2的表达则较前明显升高(P<0.01). 免疫印迹法检测结果显示以LPS孵育前以CRF(1 ng/mL)刺激即可引起cldn2表达增高, 随后加大CRF刺激浓度, 分别以10和20 ng/mL刺激, 则cldn2的表达随着刺激浓度加大而逐渐增高(P<0.05), 呈现剂量依赖效应, 而以CRF(20 ng/mL)刺激同时加入NF-κB抑制剂DEM后再以LPS孵育HT-29细胞后, CRF则不能诱导cldn2表达增高(P>0.05).

结论: CRF对肠上皮细胞中的cldn2表达刺激呈剂量依赖效应, 并且CRF对肠上皮细胞的这种诱导作用可能与NF-κB 激活有关.

Keywords: 促肾上腺皮质激素释放因子; 肠上皮细胞; 紧密连接; 脂多糖

核心提示: 本实验从体外细胞实验证实了应激因子肾上腺皮质激素释放因子(corticotrophin-releasing factor, CRF)可以刺激肠上皮细胞中紧密连接相关蛋白cldn2表达并且发现CRF对肠上皮细胞的这种诱导作用与核因子κB(nuclear factor κB)激活有关, 为体内进一步研究应激因素对肠道炎症的作用奠定了基础.