修回日期: 2012-01-21
接受日期: 2012-02-27
在线出版日期: 2012-03-28
目的: 观察人剪切修复基因人类着色性干皮病D组基因(xeroderma pigmentosum group D, XPD)转染至人肝癌细胞株SMMC-7721细胞后XPD、DNp73和GADD45β基因的表达变化以及对肝癌细胞生长的影响.
方法: 实验分4组: 重组质粒SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD(XPD组)、空载质粒SMMC-7721-pEGFP-N2组(N2组), 脂质体组和SMMC-7721细胞空白对照组. 应用Lipofectamine2000脂质体瞬时转染, 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Western blot)法检测转XPD基因后, 人肝癌细胞株SMMC-7721细胞中DNp73以及GADD45β的mRNA和蛋白质的表达量变化, 并用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖的活力, 流式细胞仪检测细胞凋亡的变化.
结果: 荧光显微镜下, XPD组和N2组细胞中观察到绿色荧光蛋白表达, 说明转染成功; RT-PCR检测显示: XPD组中DNp73 mRNA相对表达量较其他3组显著下调, XPD和GADD45β mRNA相对表达量较其他3组明显上调(均P<0.01); Western blot检测显示: XPD、DNp73以及GADD45β蛋白相对表达量在各组间的差异与其mRNA各组间差异一致; MTT检测示: SMMC-7721细胞空白对照组、脂质体组、N2组、XPD组的吸光度(A)值分别为0.633±0.012, 0.623±0.009, 0.628±0.016, 0.384±0.011, XPD组低于其他3组, 差异均有统计学意义(均P<0.01), 表明转染XPD后SMMC-7721细胞的增殖能力减弱. 流式细胞仪检测SMMC-
7721肝癌细胞凋亡: 转染XPD的SMMC-7721细胞凋亡显著, 凋亡率达56.53%, 而其他3组均未见明显凋亡.
结论: XPD基因在肝癌的发生发展中起抑制作用, 癌基因DNp73的表达随XPD表达增加而降低, 抑癌基因GADD45β则随XPD表达增加而增加, 提示两者可能在XPD抑制肝癌细胞的生长机制中起重要作用.