修回日期: 2012-02-03
接受日期: 2012-02-27
在线出版日期: 2012-03-28
目的: 探讨重组腺病毒介导KDR-CDglyTK系统杀伤胃癌SCG7901细胞时细胞缝隙连接与旁观者效应的关系.
方法: 感染复数(multiplicity of infection, MOI) = 100时, 将携带融合基因重组腺病毒体外感染SCG7901、HeLa细胞, 检测细胞的感染效率以及转基因肿瘤细胞在mRNA水平上融合基因的表达; 用荧光漂白恢复技术(fluorescence recovery after photobleaching, FRAP)检测SCG7901、HeLa细胞以及芹黄素作用上述两种细胞的细胞间通讯功能. 将已转染细胞和未转染细胞分别按10%:90%和5%:95%两种比例混合, 用含或不含芹黄素的培养基, 培养24 h后, 在不同组中分别加入GCV、5-FC两者的混合液, 72 h后用MTT法检测细胞存活率.
结果: 受感染的SCG7901和HeLa细胞中均有绿色荧光蛋白的表达. 图像中观察到在芹黄素作用下SCG7901细胞淬灭后荧光强度明显降低, 随后随着时间的推移, 被淬灭细胞的荧光强度逐渐恢复, 在相同时间内其恢复强度较未应用上调剂的SCG7901细胞要强; 而在芹黄素作用下的HeLa细胞被淬灭后荧光强度明显降低, 随时间的推移荧光强度无明显恢复, 在上调剂芹黄素作用下的SCG7901与HeLa细胞间的荧光恢复率有差异. 同时, 观察到双自杀基因系统在转基因细胞比例分别占5%、10%时, SCG7901细胞在空白组、前药组、芹黄素组、前药+芹黄素组间细胞生存率有差异(F = 144.42, P = 0.000)、(F = 407.83, P = 0.000), 而HeLa细胞在各组间的细胞生存率无统计学意义(F = 0.386, P = 0.765)、(F = 0.895, P = 0.472).
结论: FRAP技术证实SCG7901细胞间通讯功能与缝隙连接有一定关系, 而HeLa细胞不存在细胞间通讯功能. 双自杀基因系统治疗SCG7901细胞时存在旁观者效应而且上调剂可以扩大其旁杀效应; 但HeLa细胞不存在旁观者效应. 双自杀基因系统治疗胃癌细胞时旁观者效应与细胞间缝隙连接有关.