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靶向胰腺癌PANC-1细胞整合素连接激酶基因RNA干扰质粒的构建及鉴定
刘宁, 刘伟, 马刚, 郭克建, 宋少伟, 中国医科大学附属第一院普通外科胰腺外科 辽宁省沈阳市 110001
刘宁, 硕士, 讲师, 主要从事胰腺癌综合治疗工作.
基金项目: 辽宁省教育厅基金资助项目, No. 2009A783; 辽宁省科技厅基金资助项目, No. 2011225019; 沈阳市科技厅基金资助项目, No. F11-264-1-09.
作者贡献分布: 刘宁与宋少伟对此文所作贡献均等; 本课题由刘宁、刘伟、马刚、郭克建及宋少伟设计; 研究过程由刘宁与刘伟操作完成; 研究所用新试剂与数据分析由刘宁、刘伟、马刚、郭克建及宋少伟提供; 论文写作由刘宋与宋少伟完成.
通讯作者: 宋少伟, 教授, 110001, 辽宁省沈阳市和平区南京北街155号, 中国医科大学附属第一医院普通外科教研室胰腺外科. songsw10@hotmail.com
电话: 024-83283330
收稿日期: 2011-11-22
修回日期: 2012-01-04
接受日期: 2012-02-16
在线出版日期: 2012-02-18
修回日期: 2012-01-04
接受日期: 2012-02-16
在线出版日期: 2012-02-18
Abstract
目的: 构建整合素连接激酶(integrin-linked kinase, ILK)基因RNA干扰(RNA interference, RNAi)重组质粒并检测其对胰腺癌PANC-1细胞ILK基因表达的干扰效率, 为进一步研究胰腺癌中ILK基因功能奠定实验基础和理论依据.
方法: 设计并构建3条含有针对ILK基因的小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)序列的重组质粒并进行DNA测序. 通过阳离子脂质体Lipofectamine 2000将重组质粒转入人胰腺癌细胞株Panc-1细胞中, G418压力筛选至得到稳定转染细胞克隆, 利用Real-Time PCR和Western blot检测ILK基因的表达抑制情况. 筛选出干扰效率最高的重组质粒.
结果: 经DNA测序证实胰腺癌PANC-1细胞ILK基因的RNA干扰重组质粒构建成功; 重组质粒稳定转染Panc-1细胞后(各组转染效率均>90%), 各实验组ILK基因表达均被有效地抑制, 其中重组质粒-2的干扰效率最高, 其mRNA及ILK表达显著下调, 其抑制率分别为93.01%和65.69%; ILK mRNA表达较阴性对照组、空质粒组表达量显著下降(0.090±0.009 vs 1.147±0.110, 1.005±0.121, P<0.01).
结论: 成功构建ILK基因RNA干扰重组质粒, 重组质粒能有效抑制胰腺癌Panc-1细胞ILK基因表达. 为进一步研究ILK在胰腺癌中的基因功能奠定基础.
Keywords: 胰腺癌; 整合素连接激酶; RNA干扰; 基因治疗