研究快报
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世界华人消化杂志. 2012-02-08; 20(4): 314-318
Published online 2012-02-08. doi: 10.11569/wcjd.v20.i4.314
转基因重组质粒ATP4B-SV40T-IRES-GFP的构建及鉴定
张隆, 赵成根, 李大力, 王金玉, 李琦, 范忠泽
张隆, 赵成根, 王金玉, 李琦, 范忠泽, 上海中医药大学附属普陀医院 上海中医药大学中西医结合肿瘤介入研究所 上海市 200062
李大力, 华东师范大学生命医学研究所 上海市 200241
张隆, 硕士, 助理研究员, 主要从事肿瘤发病机制基础的研究.
基金项目: 上海市科委科技发展基金实验动物专项基金资助项目, No. 09140903300, No. 10140902600; 上海市重点学科基金资助项目, No. S30302; 上海市教育委员会创新重点项目基金资助项目, No. 12ZZ118; 上海市卫生局重点基金资助项目, No. 2010019.
作者贡献分布: 此课题由范忠泽、李琦及李大力设计; 质粒构建由张隆与赵成根完成; 论文写作由张隆与王金玉完成.
通讯作者: 范忠泽, 教授, 200062, 上海市兰溪路164号, 上海中医药大学附属普陀医院, 上海中医药大学中西医结合肿瘤介入研究所. lzwf@hotmail.com
收稿日期: 2011-11-05
修回日期: 2012-01-10
接受日期: 2012-02-06
在线出版日期: 2012-02-08
Abstract

目的: 构建ATP4B-SV40T-IRES-GFP重组质粒并进行鉴定.

方法: 根据小鼠ATP4B启动子序列设计引物, 获得的小鼠ATP4B基因启动子序列, 并加入限制性内切酶酶切位点. 将其装入载体IRES-GFP, 获得重组载体ATP4B-IRES-GFP并进行酶切鉴定. 之后将SV40T基因克隆入ATP4B-IRES-GFP载体, 并用限制性内切酶PstI和AseⅠ进行验证.

结果: 将小鼠ATP4B启动子序列插入IRES-GFP载体, 经过酶切验证获得正确的ATP4B-IRES-GFP质粒; 将SV40T片段插入ATP4B-IRES-GFP, 质粒测序及酶切结果验证获得正确的ATP4B-SV40T-IRES-GFP重组质粒. 显微注射入小鼠受精卵可获得阳性小鼠.

结论: 成功构建ATP4B-SV40T-IRES-GFP重组质粒, 可用于下一步构建原发性胃癌转基因小鼠.

Keywords: SV40T; ATP4B启动子; 质粒; 转基因小鼠