基础研究
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世界华人消化杂志. 2012-10-18; 20(29): 2782-2788
Published online 2012-10-18. doi: 10.11569/wcjd.v20.i29.2782
RPL31-siRNA对人胰腺癌BxPC-3细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用
李朝东, 刘春亮, 夏玉叶, 戈梅, 陈代杰
李朝东, 陈代杰, 华东理工大学生物工程学院 上海市 200237
刘春亮, 夏玉叶, 苏州西山中科实验动物有限公司 江苏省苏州市 215111
戈梅, 上海交通大学药学院 上海市 200240
戈梅, 上海来益生物药物研究开发中心有限责任公司 上海市 201203
李朝东, 在读博士, 主要从事胰腺癌基因治疗方面的研究.
基金项目: 重大新药创制-微生物药物技术创新与新药创制产学研联盟基金资助项目, No. 2010ZX09401-403.
作者贡献分布: 此课题由陈代杰与戈梅设计; 研究过程由李朝东与刘春亮完成; 本文撰写由李朝东完成; 数据分析由李朝东与刘春亮完成; 由夏玉叶提供实验指导和分析工具; 陈代杰与戈梅负责审阅论文、指导论文修改.
通讯作者: 陈代杰, 研究员, 博士生导师, 200237, 上海市梅陇路130号, 华东理工大学生物工程学院. hccbred@gmail.com
电话: 021-34207020
收稿日期: 2012-07-12
修回日期: 2012-09-05
接受日期: 2012-09-26
在线出版日期: 2012-10-18
Abstract

目的: 研究siRNA沉默糖体蛋白L31(ribosomal protein L31, RPL31)对人胰腺癌BxPC-3细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用, 探讨RPL31基因在胰腺癌中可能的作用机制.

方法: 设计合成靶向人RPL31基因的siRNA及阴性对照siRNA; 建立人胰腺癌BxPC-3细胞的Balb/c裸鼠皮下移植瘤模型, 按照移植瘤体积随机化分为3组: 溶剂对照组、阴性对照组及RPL31-siRNA干预组; 使用RNAi-Mate转染试剂将RPL31-siRNA进行移植瘤瘤内注射, 观察各组裸鼠体内瘤体生长速度, 绘制肿瘤生长曲线; 采用实时定量PCR及Western blot的方法检测移植瘤组织RPL31基因的表达; 免疫组织化学法(immunohistochemistry, IHC)检测裸鼠皮下移植瘤Ki-67及CD31的表达; 原位末端标记技术(TUNEL)检测移植瘤组织的细胞凋亡.

结果: 与溶剂对照组和阴性对照组相比, RPL31-siRNA注射组裸鼠皮下移植瘤生长缓慢, 移植瘤体积明显缩小, 差异具有统计学意义(P<0.05); 移植瘤组织中RPL31基因的mRNA水平和蛋白水平表达下调; 另外, RPL31-siRNA注射组裸鼠移植瘤中Ki-67表达下调(55.78%±4.63%、51.37%±5.05% vs 11.08%±1.31%), CD31的表达下调(56.53%±6.03%、44.84%±5.24% vs9.67%±1.39%); RPL31-siRNA注射组裸鼠移植瘤细胞凋亡增加(2.92%±0.54%、3.85%±0.87% vs 39.58%±4.02%).

结论: RPL31-siRNA可以下调胰腺癌BxPC-3细胞裸鼠皮下移植瘤中RPL31基因的表达, 抑制移植瘤的生长, 并且还可以抑制移植瘤中Ki-67及CD31的表达, 诱导移植瘤细胞的凋亡. 以RPL31为靶点的基因治疗有潜在临床应用前景.

Keywords: 胰腺癌; 核糖体蛋白L31; 裸鼠移植瘤; RNA干扰