Published online 2012-04-28. doi: 10.11569/wcjd.v20.i12.1004
修回日期: 2012-01-10
接受日期: 2012-03-15
在线出版日期: 2012-04-28
目的: 探讨人参皂苷Rg3对小鼠原发瘤切除后肝内转移瘤生长的荧光成像及血管生成的影响, 阐明人参皂苷Rg3抑制原发瘤切除促进转移瘤生长的内在机制.
方法: 慢病毒转染建立稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)基因的BALB/c小鼠结肠腺癌细胞株(BALB/c mice colon adenocarcinoma cell line, CT-26), 用细胞悬液法构建结肠癌肝转移瘤模型, 分为原发瘤切除组、原发瘤未切除组、人参皂苷Rg3组. 采用切除原发瘤及人参皂苷Rg3治疗10 d, 通过小动物活体成像系统观察肝转移瘤的生长情况. 应用组织切片苏木素-伊红染色法, 观察肿瘤转移灶情况. SP免疫组织化学法检测转移瘤MVD及细胞增殖, TUNEL技术检测转移瘤细胞凋亡.
结果: 应用慢病毒转染获得稳定表达高强度绿色荧光的CT-26-GFP细胞株. 结肠癌肝转移模型治疗结束后, 用波长470 nm的蓝光激发, 通过荧光活体成像系统观察剖离肝脏转移灶发出绿色荧光. 原发瘤切除后, 人参皂苷Rg3组平均肝转移灶荧光值较原发瘤未切除组及原发瘤切除组有明显的下降(314.17±54.23, 388.82±25.97, 427.18±44.31); 人参皂苷Rg3组、原发瘤未切除组和原发瘤切除组转移瘤发生率分别为40%, 50%, 100%; 平均肝脏质量分别为2.92 g±0.60 g, 3.80 g±0.33 g, 3.98 g±0.52 g; 转移瘤血管密度分别为27.10±3.41, 42.60±8.42, 62.40±5.08; 转移瘤细胞Ki67的表达分别为34.70±6.46, 54.30±8.98, 65.20±3.82; 转移瘤细胞凋亡指数分别为28.37±3.86, 12.50±2.99, 9.90±2.88.
结论: 稳定表达绿色荧光蛋白的CT-26-GFP细胞系及其动物模型可以为原发瘤切除研究提供理想的实验材料, 应用小动物活体成像系统能够客观定量评价肿瘤在小鼠肝脏的生长情况. 人参皂苷Rg3明显抑制小鼠原发瘤切除后肝内转移瘤的生长, 明显抑制转移瘤的血管生成及细胞增殖, 促进细胞凋亡.