研究快报
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世界华人消化杂志. 2011-03-18; 19(8): 827-831
Published online 2011-03-18. doi: 10.11569/wcjd.v19.i8.827
RNA干扰p21对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响
谭晓虹, 徐恒, 韦长元, 曹骥, 崔凌飞, 刘斐
谭晓虹, 广西医科大学附属肿瘤医院化疗三科 广西壮族自治区南宁市 530021
徐恒, 广西医科大学医学科学实验中心 广西壮族自治区南宁市 530021
韦长元, 广西医科大学附属肿瘤医院乳腺外科 广西壮族自治区南宁市 530021
曹骥, 广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部 广西壮族自治区南宁市 530021
崔凌飞, 广西壮族自治区南溪山医院 广西壮族自治区桂林市 541002
刘斐, 广西壮族自治区人民医院医学实验中心 广西壮族自治区南宁市 530021
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30672363; No. 30950028;广西研究生教育创新计划基金资助项目, No. 20081059810 02D34.
作者贡献分布: 此课题由谭晓虹、徐恒及韦长元设计; 研究过程由谭晓虹、曹骥、崔凌飞及刘斐操作完成; 数据分析和论文写作由谭晓虹完成.
通讯作者: 徐恒, 教授, 530021, 广西壮族自治区南宁市, 广西医科大学医学科学实验中心. heng6888@yahoo.com
收稿日期: 2010-11-21
修回日期: 2011-02-18
接受日期: 2011-02-22
在线出版日期: 2011-03-18
Abstract

目的: 探讨RNA干扰技术沉默p21基因对肝癌细胞SMMC-7721增殖及恶性表型变化的影响.

方法: 通过慢病毒载体将p21小干扰RNA片段稳定转染入SMMC-7721细胞, 通过RT-PCR、Western blot分别检测p21 mRNA和蛋白表达变化, 流式细胞仪检测7721-p21 RNAi组(感染p21 siRNA慢病毒载体组)、7721-NC组(感染阴性对照慢病毒载体组)、7721组(未转染组)细胞生长周期, MTT法检测转染后SMMC-7721细胞生长情况, 细胞克隆形成实验检测单细胞锚定依赖性成克隆能力.

结果: 慢病毒载体可有效介导p21小干扰RNA片段进入SMMC-7721细胞, 经RT-PCR及Western blot检测, p21小干扰RNA可以明显降低SMMC-7721细胞p21 mRNA和蛋白的表达. 流式细胞仪检测细胞周期发现, 各组G0/G1期比例分别为32.82%±3.27%、61.25%±0.76%、57.77%±4.08%, S期比例分别为42.56%±5.62%, 22.91%±1.53%, 25.13%±5.11%. 经统计学分析, 7721-p21 RNAi组G0/G1期比例较其余两组下降(P<0.05), S期比例较其余两组升高(P<0.05), 而7721-NC组与7721组相比差异无显著性. MTT法检测细胞生长速度发现, 与7721-NC和7721组细胞相比, 7721-p21 RNAi组细胞的生长速度较快, 每天的活细胞数目均多于另外两种细胞系(P<0.05). 细胞克隆形成实验发现7721-p21 RNAi组、7721-NC组及7721组克隆形成数分别为81.24±1.5、51.67±2.08、52.73±1.53个. 7721-p21 RNAi组克隆形成数明显多于7721-NC组、7721组(P<0.05), 7721-NC组克隆形成数与7721组无明显差异. 表明p21表达下降可加速SMMC-7721细胞从G1期进入S期, 细胞生长速度加快, 单细胞锚定依赖性成克隆能力增强.

结论: 本研究通过RNA干扰技术反向验证了p21具有抑制肝癌细胞生长及细胞周期进程的作用, 为下一步深入研究p21抑制细胞增殖的机制及在肝癌发生发展中所起的作用打下了基础.

Keywords: RNA干扰; p21基因; 肝细胞癌; 细胞周期