基础研究
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世界华人消化杂志. 2011-12-28; 19(36): 3643-3648
Published online 2011-12-28. doi: 10.11569/wcjd.v19.i36.3643
siRNA沉默Bmi-1基因对人肝癌细胞株MHCC97-H侵袭迁移能力的影响
李小磊, 宋文杰, 陈战, 陈亚峰, 李霄, 周亮, 张福琴, 窦科峰
李小磊, 宋文杰, 陈战, 陈亚峰, 李霄, 周亮, 张福琴, 窦科峰, 中国人民解放军第四军医大学西京医院肝胆胰脾外科 陕西省西安市 710032
李小磊, 在读硕士, 主要从事肝癌侵袭转移分子机制的研究.
作者贡献分布: 李小磊与宋文杰对此文所作贡献均等; 此课题由李小磊、宋文杰、窦科峰及张福琴设计; 研究过程由李小磊、陈战及陈亚峰操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由窦科峰提供; 数据分析由李小磊完成; 本论文写作由李小磊、李霄及周亮完成.
通讯作者: 窦科峰, 教授, 主任医师, 710032, 陕西省西安市, 中国人民解放军第四军医大学西京医院肝胆胰脾外科. gdwkgwx@fmmu.edu.cn
电话: 029-84775259
收稿日期: 2011-09-23
修回日期: 2011-10-28
接受日期: 2011-11-04
在线出版日期: 2011-12-28
Abstract

目的: 探讨RNA 干扰技术沉默Bmi-1基因表达后, 对人肝癌细胞株MHCC97-H侵袭迁移能力的影响.

方法: 设计并合成针对Bmi-1基因序列特异性的双链小干扰RNA(Bmi-1-siRNA), 转染高转移性人肝癌细胞株MHCC97-H, 用流式细胞仪观察转染效率, 荧光实时定量PCR 和Western blot 检测Bmi-1基因的mRNA和蛋白表达水平; 通过体外Transwell小室基质侵袭和迁移实验, 观察 Bmi-1表达沉默后对人肝癌细胞株 MHCC97-H侵袭和迁移能力的影响.

结果: 将针对Bmi-1基因序列特异性的小干扰RNA(Bmi-1-siRNA)转染高转移性人肝癌细胞株MHCC97-H后, 流式细胞仪显示, 转染效率可达到91%. 与空白组、对照siRNA组相比, 实验组Bmi-1-siRNA能有效抑制MHCC97-H细胞中Bmi-1基因的mRNA(F = 56.199, P<0.05)和蛋白表达水平. 通过Transwell小室基质侵袭和迁移实验, 我们分析了不同组细胞的侵袭迁移能力. 结果发现, 与空白组、对照siRNA组相比, Bmi-1-siRNA转染的MHCC97-H细胞穿透能力明显降低(F = 186.66, 12.746, P<0.05).

结论: 沉默Bmi-1基因表达可抑制肝癌细胞株MHCC97-H的侵袭迁移力.

Keywords: RNA干扰; 肝肿瘤; Bmi-1; 侵袭; 转移