基础研究
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世界华人消化杂志. 2011-08-28; 19(24): 2521-2526
Published online 2011-08-28. doi: 10.11569/wcjd.v19.i24.2521
靶向SET的shRNA真核表达质粒的构建及鉴定
师海蓉, 付政祺, 邓昊, 王绪明, 镇鸿燕, 陈莹, 刘丽江
师海蓉, 付政祺, 镇鸿燕, 陈莹, 江汉大学医学院病理学与病理生理学教研室 湖北省武汉市 430056
师海蓉, 邓昊, 刘丽江, 江大病理诊断所 湖北省武汉市 430056
王绪明, 武汉大学基础医学院 湖北省武汉市 430071
师海蓉, 讲师, 主要从事胃肠道肿瘤病理学与病理生理学的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30870981; No. 81001082; No. 81000884.
作者贡献分布: 此课题由师海蓉与刘丽江设计; 研究过程由师海蓉、付政祺、邓昊、王绪明及镇鸿燕等操作完成; 数据分析由师海蓉与陈莹完成; 本论文写作由师海蓉完成.
通讯作者: 刘丽江, 教授, 430056, 湖北省武汉市沌口经济技术开发区三角湖路8号, 江大病理诊断所. liulijiang@163.com
电话: 027-82411803 传真: 027-84226503
收稿日期: 2011-06-07
修回日期: 2011-08-12
接受日期: 2011-08-23
在线出版日期: 2011-08-28
Abstract

目的: 针对PP2A内源性抑制剂SET基因的不同部位, 构建靶向SET的shRNA真核表达质粒, 鉴定并筛选出最佳抑制效率的表达质粒.

方法: 针对SET基因的不同部位设计4对短发卡RNA(shRNA)的寡核苷酸片段, 克隆到真核表达载体pGPU6中, 构建靶向SET的shRNA真核表达质粒pGPU6/GFP/Neo-SET-shRNA-1、2、3、4. 利用脂质体转染人胃癌细胞株BGC-823, Western blot法检测并筛选最佳抑制效率的shRNA表达质粒.

结果: 4个靶向SET的shRNA真核表达质粒pGPU6/GFP/Neo-SET-shRNA-1、2、3、4经限制性酶切和测序证实基因已正确插入, 荧光显示转染效率可达到80%以上. Western blot法证实pGPU6/GFP/Neo-SET-shRNA-3明显降低BGC-823细胞内SET蛋白的表达. pGPU6/GFP/Neo-SET-shRNA-3对SET蛋白表达的抑制效应在72h达到最强.

结论: 成功构建靶向SET的shRNA真核表达质粒pGPU6/GFP/Neo-SET-shRNA-1、2、3、4, 并筛选出最佳抑制效率的表达质粒, 为今后研究SET在胃癌中的作用机理奠定了基础.

Keywords: SET; 短发卡RNA; 胃癌; 蛋白磷酸酶2A