基础研究
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世界华人消化杂志. 2011-08-18; 19(23): 2443-2449
Published online 2011-08-18. doi: 10.11569/wcjd.v19.i23.2443
野生型p53对肝癌细胞POLD1基因表达及细胞恶性表型的影响
韦长元, 刘起理, 廖柳凤, 徐恒, 谭晓虹
韦长元, 刘起理, 廖柳凤, 谭晓虹, 广西医科大学附属肿瘤医院 广西壮族自治区南宁市 530021
徐恒, 广西医科大学医学实验中心 广西壮族自治区南宁市 530021
韦长元, 博士研究生, 教授, 主要从事肝癌的基础与临床和乳腺癌的生物学特性与临床治疗对策研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 303296
作者贡献分布: 韦长元负责实验操作指导、数据分析和论文起草修改; 刘起理与廖柳凤主要进行实验操作、数据分析和论文起草; 徐恒负责实验设计、论文修改和审阅; 谭晓虹主要进行实验操作、数据分析.
通讯作者: 徐恒, 教授, 530021, 广西壮族自治区南宁市, 广西医科大学医学实验中心. heng6888@yahoo.com
收稿日期: 2011-06-03
修回日期: 2011-07-23
接受日期: 2011-08-05
在线出版日期: 2011-08-18
Abstract

目的: 探讨野生型p53对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖和细胞恶性表型影响的一种可能机制.

方法: 设计并构建p53特异性小干扰shRNA绿色荧光真核表达质粒(p53-siRNA)和表达EGFP-p53融合蛋白的p53绿色荧光真核增强表达质粒(pEGFP-p53), 通过脂质体Lipofection-2000介导转染, 将表达pEGFP-p53重组质粒、p53-siRNA及空载体pEGFP-C1转染入SMMC-7721细胞; 经G418筛选, 获得稳定细胞系7721-p53、7721-C1; 7721-p53RNAi、7721-NC. 通过RT-PCR检测转染后p53、POLD1 mRNA表达水平. 通过生长曲线测定, 克隆形成实验, 了解SMMC-7721细胞在p53表达水平改变后细胞癌性的变化.

结果: 与人肝癌细胞SMMC-7721比较, 转染质粒pEGFP-p53的野生型p53高表达组, p53 mRNA表达量增高, POLD1基因的表达量降低; 而转染pGPU6/GFP/neo-p53i-769的p53低表达组, p53 mRNA表达量降低, POLD1 mRNA表达量增高, 其他组较空白对照无明显变化. 对高表达野生型p53的人肝癌细胞系SMMC-7721-pEGFP-C1-p53, 低表达野生型p53的人肝癌细胞系SMMC-7721-pGPU6/GFP/neo-p53i-769, 和普通人肝癌细胞SMMC-7721分别进行MTT和平板克隆形成实验. MTT结果发现: SMMC-7721-pGPU6/GFP/neo-p53i-769的细胞其生长速度比普通肝癌细胞的要快, 而SMMC-7721-pEGFP-p53的细胞较普通肝癌细胞生长速度较慢.克隆形成实验结果显示: pEGFP-C1-p53、pGPU6/GFP/neo-p53i-769组克隆形成率分别为38.1%和72.6%, 与普通肝癌细胞SMMC-7721的克隆形成率52.6%相比, 均有统计学差异(P<0.05).结果显示: 在人肝癌细胞SMMC-7721中, 野生型p53高表达组能够抑制POLD1的基因转录, 并抑制细胞增殖活性; 而低表达组能够促进POLD1的基因转录, 促进细胞增殖.

结论: p53对POLD1的调控作用可能是p53对肝癌细胞增殖和细胞恶性表型影响的一种新的机制.

Keywords: SMMC-7721; POLD1; p53; RNA干扰