基础研究
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世界华人消化杂志. 2011-08-18; 19(23): 2437-2442
Published online 2011-08-18. doi: 10.11569/wcjd.v19.i23.2437
siRNA沉默NHE1基因对MHCC97-H肝癌细胞侵袭迁移的影响
孙伟, 王德盛, 杨薛康, 周亮, 张勇, 苟泽鹏, 祝普利, 张福琴, 窦科峰
孙伟, 王德盛, 周亮, 张勇, 苟泽鹏, 祝普利, 张福琴, 窦科峰, 中国人民解放军第四军医大学西京医院肝胆胰脾外科 陕西省西安市 710032
杨薛康, 中国人民解放军第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科 陕西省西安市 710032
孙伟, 在读硕士, 主要从事肝癌的复发与转移的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30872480; 陕西省科技研究发展计划基金资助项目, No. 2008K09-05; 西京医院学科助推计划基金资助项目, No. XJZT07M013
作者贡献分布: 此课题由王德盛, 杨薛康立题设计; 研究过程由孙伟, 周亮, 张勇, 苟泽鹏, 祝普利操作完成; 数据分析由孙伟, 周亮, 张勇完成; 本论文写作由孙伟完成; 王德盛, 窦科峰, 张福琴审校.
通讯作者: 王德盛, 副教授, 副主任医师, 710032, 陕西省西安市, 中国人民解放军第四军医大学西京医院肝胆胰脾外科. wangds@fmmu.edu.cn
电话: 029-84775259 传真: 029-84775255
收稿日期: 2011-06-03
修回日期: 2011-08-08
接受日期: 2011-08-12
在线出版日期: 2011-08-18
Abstract

目的: 探讨RNA干扰沉默NHE1基因后对人肝癌细胞株MHCC97-H细胞侵袭迁移的影响.

方法: 应用NHE1基因小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)转染人肝癌细胞株MHCC97-H细胞, 同时设立空白对照组和无关对照组. 转染成功后采用RT-PCR和Western blot分别从基因和蛋白水平检测RNA干扰沉默NHE1基因的效果. MTT法测定转染后三组细胞的增殖状况, Transwell小室检测沉默NHE1基因对MHCC97-H细胞侵袭、转移能力的影响, 进一步采用免疫荧光观察其对MHCC97-H细胞骨架和伪足的影响.

结果: 与两对照组比较, 转染NHE1-siRNA组NHE1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05); 细胞侵袭、迁移实验结果显示, NHE1-siRNA组穿透人工基底膜的细胞数(34.1±5.2, 120.2±12.8)较空白对照组(56.9±6.1, 235.2±16.8)和转染无关对照组(57.2±6.1, 231.9±14.7)均明显减少, 差异均有统计学意义(P<0.05), 而空白对照组与无关对照组比较差异无统计学意义; MTT结果显示, 转染后48 h和72 h三组细胞间增殖活性差异无统计学意义; NHE1基因沉默后与两对照组相比, MHCC97-H细胞膜伪足形成减少, 细胞内肌动蛋白网排列紊乱.

结论: siRNA沉默NHE1基因后可能通过影响MHCC97-H细胞骨架的重组和伪足的形成, 从而抑制MHCC97-H细胞的侵袭和迁移能力.

Keywords: 肝癌; 钠氢交换蛋白1; RNA干扰; 细胞骨架