基础研究
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世界华人消化杂志. 2011-07-28; 19(21): 2226-2232
Published online 2011-07-28. doi: 10.11569/wcjd.v19.i21.2226
DR-nm23基因慢病毒表达载体的构建及其在人结直肠癌SW620细胞中的表达
曲利娟, 苏娟娟, 梁莉
曲利娟, 苏娟娟, 中国人民解放军南京军区福州总医院病理科 福建省福州市 350025
梁莉, 南方医科大学南方医院病理科 广东省广州市 510515
基金项目: 福建省自然科学基金资助项目, No. X0650096; 南京军区医药卫生科研基金资助项目, No. 06MA150.
作者贡献分布: 本课题由曲利娟设计; 研究过程由苏娟娟操作完成; 数据整理分析由苏娟娟与梁莉完成; 本论文写作由曲利娟完成.
通讯作者: 曲利娟, 副主任医师, 350025, 福建省福州市西二环北路156号, 中国人民解放军南京军区福州总医院病理科. qljuan6516@ sina.com.cn
电话: 0591-83717703
收稿日期: 2011-05-03
修回日期: 2011-06-30
接受日期: 2011-07-11
在线出版日期: 2011-07-28
Abstract

目的: 构建DR-nm23基因慢病毒表达载体及建立DR-nm23基因稳定表达的人结直肠癌SW620细胞系, 为DR-nm23基因功能研究奠定基础.

方法: 应用逆转录聚合酶链反应方法筛选无内源性DR-nm23基因表达的人结直肠癌细胞系. 通过AgeⅠ酶切获得DR-nm23 cDNA片段, 并将其交换连接到慢病毒表达载体pGC-FU中. 慢病毒表达质粒pGC-FU-DR-nm23-GFP和包装质粒共转染293T细胞, 孔稀释法测定慢病毒滴度. 获得重组的慢病毒, 感染人结直肠癌SW620细胞, 荧光显微镜观察绿色荧光蛋白及Western blot检测DR- nm23在SW620细胞中的表达.

结果: 低转移性结直肠癌SW480、HT29细胞DR-nm23基因高表达, 而高转移性SW620细胞不表达. 重组慢病毒质粒pGC-FU-DR-nm23-GFP酶切鉴定结果与目的基因条带吻合, 克隆测序结果与NCBI收录的DR-nm23基因序列(NM_002510)完全一致. 重组慢病毒质粒可高效转染293T细胞, 慢病毒滴度为2E+9 TU/mL. 收集慢病毒上清液感染SW620细胞, 荧光显微镜下观察85%细胞表达绿色荧光. 感染后SW620细胞DR-nm23稳定高表达.

结论: 成功构建了携带DR-nm23与GFP融合基因的慢病毒表达载体pGC-FU-DR-nm23- GFP, 获得了DR-nm23基因稳定表达的结直肠癌SW620细胞系. 该细胞系可作为研究DR-nm23基因功能研究的可靠细胞模型.

Keywords: 结直肠癌; SW620细胞系; DR-nm23基因; 慢病毒载体; 基因转染