基础研究
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世界华人消化杂志. 2011-05-18; 19(14): 1451-1456
Published online 2011-05-18. doi: 10.11569/wcjd.v19.i14.1451
胃癌中靶向E2F1基因的miR-331真核表达载体的构建及功能
程力, 李乐平, 张黎, 靖昌庆, 徐韬, 李辰生, 郭晓波
程力, 李乐平, 张黎, 靖昌庆, 徐韬, 李辰生, 郭晓波, 山东大学附属山东省立医院胃肠外科 山东省济南市 250021
程力, 副主任医师, 主要从事胃肠道肿瘤发生机制的研究.
作者贡献分布: 程力与李乐平对此文所作贡献均等; 此课题由郭晓波、程力及李乐平设计; 实验过程由郭晓波、徐韬及李辰生操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由靖昌庆与张黎提供; 数据分析由郭晓波与徐韬完成; 本论文写作由郭晓波与程力完成.
通讯作者: 郭晓波, 250021, 山东省济南市, 山东大学附属山东省立医院胃肠外科. guo992352@hotmail.com
电话: 0531-85187117
收稿日期: 2011-02-07
修回日期: 2011-03-25
接受日期: 2011-04-11
在线出版日期: 2011-05-18
Abstract

目的: 研究构建靶向E2F1基因的miR-331真核表达载体, 评估其转染人胃癌细胞株SGC-7901细胞后对E2F1基因的干扰效果及其功能, 探讨miR-331在胃癌中可能的作用机制.

方法: 将外源性重组真核表达载体pSuper/miR-331转染到人胃癌细胞株SGC-7901内, 经G418筛选并建立高表达miR-331的稳定转染细胞株. 稳定表达该miR-331的细胞为SGC-7901-pSuper/miR-331组, 转染空质粒细胞及未处理细胞SGC-7901-pSuper组和SGC-7901组作为对照, 采用实时荧光定量PCR验证miR-331在稳定转染细胞的表达, 蛋白印迹检测其对E2F1基因表达的干扰效果和SGC-7901细胞的功能.

结果: 与SGC-7901-pSuper组相比, 转染了pSuper/miR-331高表达质粒的SGC-7901细胞中E2F1蛋白表达明显减少, 降低了4.27倍(0.206±0.037 vs 0.879±0.082, P<0.05); 与SGC-7901-pSuper组相比, 转染了pSuper/miR-331高表达质粒的SGC-7901细胞的克隆形成明显减少, 降低了3.80倍(1.863±0.098 vs 7.074±0.182, P<0.05), 而SGC-7901-pSuper组与SGC-7901组组间无统计学意义.

结论: miR-331真核表达载体构建和稳定表达胃癌细胞筛选成功, 为继续深入的研究miR-331在胃癌中的功能奠定了基础.

Keywords: 胃癌; 微小RNA-331; 表达载体; SGC-7901细胞