基础研究
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世界华人消化杂志. 2011-05-18; 19(14): 1446-1450
Published online 2011-05-18. doi: 10.11569/wcjd.v19.i14.1446
人pEGFP-PKARIIβ重组质粒的构建及其在BGC-823胃癌细胞中的表达
王桂玲, 姜佩佳, 王孝会, 陈薇
王桂玲, 姜佩佳, 王孝会, 陈薇, 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室 卫生部细胞生物学重点实验室 辽宁省沈阳市 110001
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30871294.
作者贡献分布: 此课题设计及论文写作由姜佩佳与王桂玲负责; 课题的具体实施由姜佩佳与王桂玲负责; 分析数据由王孝会与陈薇完成.
通讯作者: 王桂玲, 副教授, 硕士生导师, 110001, 辽宁省沈阳市, 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室. wanggl2000@163.com
电话: 024-23256666-5347
收稿日期: 2011-04-10
修回日期: 2011-05-09
接受日期: 2011-05-17
在线出版日期: 2011-05-18
Abstract

目的: 研究人的蛋白激酶A调节亚基RIIβ (PKARIIβ)基因的绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体融合蛋白在胃癌细胞BGC-823内的表达和定位, 初步探讨其在肿瘤细胞中的分子作用机制.

方法: 以pRSETB-PKARIIβ质粒为模板, PCR扩增出全长PKARIIβ编码序列, 用XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后, 亚克隆至含有GFP标签的融合表达载体pEGFP-C1中. 测序正确后, 将重组质粒转染到胃癌细胞BGC-823中, 提取细胞蛋白进行Western bolt检测. 利用共聚焦激光扫描显微镜观察pEGFP-PKARIIβ在人胃癌细胞BGC-823内的定位.

结果: 将人全长PKARIIβ编码序列克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中, 酶切鉴定片段为1.2 kb, 在预期的位置产生条带. Western blot检测到了融合蛋白正确表达, 分子量约为72 000 Da. 并观察到GFP-PKARIIβ在HEK293和BGC-823细胞内都有表达, 且定位以细胞质为主, 在细胞核内少量表达.

结论: 成功构建了人全长PKARIIβ编码序列的pEGFP-PKARIIβ真核表达载体, 证实GFP-PKARIIβ蛋白在BGC-823细胞质内特异表达, 为进一步研究PKARIIβ的在胃癌中的功能提供了重要的实验材料.

Keywords: PKARIIβ; 真核表达; 绿色荧光蛋白; 基因转染; 胃癌细胞