基础研究
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世界华人消化杂志. 2011-04-18; 19(11): 1115-1121
Published online 2011-04-18. doi: 10.11569/wcjd.v19.i11.1115
MCFP慢病毒干涉载体及HepG2稳定细胞系的构建
笪倩, 于淼, 杨晓明, 汪思应
笪倩, 于淼, 杨晓明, 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 北京市 100850
笪倩, 汪思应, 安徽医科大学病理生理学教研室 安徽省合肥市 230032
笪倩, 硕士, 主要从事蛋白质相互作用方面的研究.
基金项目: 国家重点基础研究发展计划(973计划)基金资助项目, No. 2006CB910802;国家高技术研究发展计划(863计划)基金资助项目, No. 2006AA02A310.
作者贡献分布: 笪倩与于淼对此文所作贡献均等; 本课题设计由笪倩、于淼、杨晓明及汪思应完成; 研究过程由笪倩与于淼共同完成; 本论文写作由笪倩完成.
通讯作者: 汪思应, 教授, 230032, 安徽省合肥市梅山路69号, 安徽医科大学病理生理教研室. sywang@ahmu.edu.cn
电话: 0551-5167706
收稿日期: 2011-01-14
修回日期: 2011-02-21
接受日期: 2011-03-02
在线出版日期: 2011-04-18
Abstract

目的: 研究线粒体转运蛋白质超家族新成员SLC25A40(MCFP) RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体对人肝癌细胞系HepG2细胞中MCFP基因的沉默效果.

方法: 通过RNAi序列设计软件进行MCFP干涉片段设计, 筛选出MCFP基因的RNAi有效靶序列, 进一步合成靶序列的Oligo DNA, 构建pSiCoR-MCFP慢病毒载体并包装产生慢病毒干涉毒液. 运用病毒感染HepG2细胞获得稳定干涉MCFP的细胞株, 利用PCR和Western blot方法检测稳定细胞株中MCFP的干涉效果.

结果: 成功构建具有MCFP干涉效果的慢病毒干涉载体并获得了稳定干涉MCFP及对照的HepG2细胞株. 收集慢病毒上清, 流式测定干涉病毒滴度为1.45×1010 pfu/L, 对照病毒滴度为1.78×1010 pfu/L. PCR和Western blot实验均证实干涉MCFP后, HepG2细胞株中MCFP蛋白表达水平明显降低(P<0.001).

结论: 成功构建具有MCFP干涉效果的慢病毒干涉载体及稳定干涉MCFP的HepG2细胞株.

Keywords: 慢病毒; 线粒体转运蛋白超家族成员; RNA干扰; 人肝癌细胞系HepG2