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沉默Bmi-1基因表达对胃癌细胞BGC823衰老和转移的作用
高凤兰, 赵国强, 郑州大学基础医学院 河南省郑州市 450001
高凤兰, 刘春灵, 李维山, 漯河医学高等专科学校 河南省漯河市 462002
高凤兰, 郑州大学在读硕士, 教授, 主要从事消化系肿瘤病理研究.
作者贡献分布: 高凤兰、刘春灵及李维山对此文贡献均等; 此课题由赵国强指导, 高凤兰、刘春灵及李维山设计; 研究过程、论文撰写由高凤兰、刘春灵及李维山共同完成; 赵国强提供实验仪器、试剂及数据分析工具, 指导论文撰写.
通讯作者: 高凤兰, 教授, 462002, 河南省漯河市, 漯河医学高等专科学校病理检验研究中心. lhyzgao@126.com
收稿日期: 2009-11-06
修回日期: 2009-12-06
接受日期: 2009-12-21
在线出版日期: 2010-02-08
修回日期: 2009-12-06
接受日期: 2009-12-21
在线出版日期: 2010-02-08
Abstract
目的: 研究靶向Bmi-1 siRNA对胃癌BGC823细胞衰老和转移的作用.
方法: 设计Bmi-1的siRNA靶序列, 分别合成两条互补的寡核苷酸链, 退火后重组入pRNAT-U6.2载体, 转化扩增后进行序列测定. 用脂质体包裹转染人胃癌BGC823细胞, 采用RT-PCR和Western blot分别检测Bmi-1基因mRNA和蛋白表达的变化. SA-β-Gal染色检测和细胞体外侵袭实验检测分析对细胞衰老和侵袭、转移的影响.
结果: 靶向Bmi-1基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆入pRNAT-U6.2载体, 经测序分析, 插入片段正确; RT-PCR和Western blot检测显示, Bmi-1基因的表达水平明显降低, 其中以1 104-1 122 nt(GGAGGAGGTGAATGAT AAA)为靶序列的siRNA沉默作用最佳, Bmi-1 mRNA和蛋白表达几乎完全抑制. 转染siRNA组的衰老细胞百分率显著升高、穿透Matrigel的细胞数显著下降, 与未转染和转染空载体组比较差异有显著性(P<0.01).
结论: 抑制胃癌BGC823细胞Bmi-1基因表达, 可以增加细胞的衰老和降低细胞侵袭、转移的能力.
Keywords: Bmi-1; siRNA; 胃癌; 细胞衰老; 细胞转移