研究快报
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世界华人消化杂志. 2010-12-28; 18(36): 3900-3904
Published online 2010-12-28. doi: 10.11569/wcjd.v18.i36.3900
丙型肝炎病毒E2结合蛋白基因在人胰腺细胞cDNA文库中的筛选
张婷, 任娜, 田梅梅, 李贲, 张锦前, 成军
张婷, 任娜, 田梅梅, 李贲, 张锦前, 成军, 北京地坛医院 首都医科大学传染病研究所 北京市 100015
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30600524.
作者贡献分布: 此课题由张锦前设计; 研究过程由张婷、任娜、田梅梅、李贲及张锦前操作完成: 数据分析由张婷、任娜、田梅梅、李贲及张锦前完成; 本论文写作由张婷、张锦前及成军完成.
通讯作者: 成军, 主任医师, 100015, 北京市朝阳区京顺东街8号, 北京地坛医院, 首都医科大学传染病研究所. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-84322291
收稿日期: 2010-01-07
修回日期: 2010-11-02
接受日期: 2010-11-23
在线出版日期: 2010-12-28
Abstract

目的: 筛选人胰腺细胞cDNA文库中与HCV包膜糖蛋白E2相互作用的结合蛋白的编码基因.

方法: 扩增人胰腺细胞cDNA文库进行纯化鉴定, 并将文库质粒转化酵母菌株Y187. 诱饵质粒pGBKT7-E2转化酵母菌株AH109, 在色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落. 应用酵母双杂交系统3将阳性重组AH109菌株与重组酵母菌株Y187进行配合, 在4缺培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和铺有X-α-gal的4缺培养基上进行筛选, 提取蓝色酵母菌落质粒, 电转化大肠埃希菌DH5α后再提取质粒测序. 测序结果进行序列比对.

结果: 成功构建人胰腺cDNA文库以及pGBKT7-HCV E2重组质粒, 筛选出8种与HCV E2蛋白相结合的蛋白基因, 分别为: 胰凝乳蛋白酶原B1前体、胰蛋白酶原、胆盐刺激酯酶、CDK5、羧肽酶B1、人类v-Ki-ras2、鼠Kirsten肉瘤、弹性蛋白酶3A及辅脂肪酶.

结论: 筛选出的与HCV E2蛋白结合的人胰腺细胞蛋白基因中, 部分与2型糖尿病、肝脏脂肪变性密切相关.

Keywords: 胰腺; 丙型肝炎病毒; 人胰腺cDNA文库; 酵母菌杂交; 遗传