研究快报
Copyright ©The Author(s) 2010. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2010-10-08; 18(28): 3003-3007
Published online 2010-10-08. doi: 10.11569/wcjd.v18.i28.3003
幽门螺杆菌通过p38MAPK信号通路上调人胃癌MKN45细胞中COX-2启动子的活性
刘宣, 刘宁宁, 王炎, 殷佩浩, 吴琼, 周宁, 孙珏, 范忠泽, 李琦
刘宣, 刘宁宁, 王炎, 殷佩浩, 吴琼, 周宁, 孙珏, 范忠泽, 李琦, 上海中医药大学附属普陀医院 上海中医药大学中西医结合肿瘤介入研究所 上海市 200062
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 81072955; No. 30600844;上海市重点学科基金资助项目, No. S30302;上海市普陀区科技创新重大基金资助项目, No. 2009-37-2;上海市教委青年基金科研资助项目, No. 09JW44.
作者贡献分布: 本课题由李琦设计; 研究过程由刘宣、刘宁宁、王炎、吴琼及周宁共同完成; 研究所用试剂及分析工具由李琦与范忠泽提供; 数据分析由殷佩浩与孙珏完成; 本文写作由刘宣与刘宁宁共同完成.
通讯作者: 李琦, 副教授, 副主任医师, 200062, 上海市兰溪路164号, 上海中医药大学附属普陀医院, 上海中医药大学中西医结合肿瘤介入研究所. lzwf@hotmail.com
电话: 021-52669731 传真: 021-52665957
收稿日期: 2010-08-03
修回日期: 2010-08-26
接受日期: 2010-08-31
在线出版日期: 2010-10-08
Abstract

目的: 探讨H.pylori感染对人胃癌MKN45细胞环氧合酶2(COX-2)启动子荧光素酶报告基因重组质粒(pGL3-Basic-COX-2-promoter)活性的影响及p38MAPK信号通路对其的调控作用.

方法: 将构建的COX-2启动子pGL3-Basic-COX-2-promoter和内参质粒pRL-SV40共转染人胃癌MKN45细胞, 加入100倍细胞数量的H.pylori共培养一段时间后, 检测双荧光素酶的活性. Western blot检测H.pylori感染对人胃癌MKN45细胞p38MAPK信号通路的激活作用. 运用p38MAPK特异性抑制剂SB203580阻断p38MAPK信号通路, 观察H.pylori对MKN45细胞COX-2启动子活性的影响.

结果: 瞬时转染实验显示, COX-2启动子在MKN45细胞中的转录表达随时间的变化而升高, 转染后40 h的双报告基因活性是转染后8 h的3.5倍(P<0.01); 加入H.pylori共培养后, 同时间点的荧光素酶活性明显升高(P<0.05或P<0.01), 转染后40 h的活性是转染后8 h的5倍(P<0.01). H.pylori感染20 min后, p38MAPK信号通路被激活, 60 min达峰值; 加入p38MAPK信号通路特异性抑制剂SB203580抑制p38MAPK信号通路后, COX-2启动子的活性均明显下调.

结论: H.pylori感染通过p38MAPK信号通路上调COX-2启动子活性, 这可能是H.pylori促进胃癌发生发展的重要因素之一.

Keywords: 胃癌; 幽门螺杆菌; 环氧合酶2; 启动子; p38丝裂原活化蛋白激酶; 信号转导