研究快报
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世界华人消化杂志. 2010-07-28; 18(21): 2253-2257
Published online 2010-07-28. doi: 10.11569/wcjd.v18.i21.2253
IKKα基因靶向shRNA真核表达载体的构建及表达
刘丽丽, 陈芳辉, 李宙雪, 占日新, 高艳, 陈元红, 李丽, 黄起壬
刘丽丽, 陈芳辉, 李宙雪, 占日新, 高艳, 陈元红, 李丽, 黄起壬, 南昌大学药学系药理学与分子治疗学实验室 江西省南昌市 330006
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30860111.
作者贡献分布: 此课题由黄起壬与刘丽丽设计; 研究过程由刘丽丽、陈芳辉、李宙雪、占日新及高艳操作完成; 全程由黄起壬指导; 数据分析由刘丽丽、陈元红及李丽完成; 本论文写作由刘丽丽完成.
通讯作者: 黄起壬, 教授, 330006, 江西省南昌市, 南昌大学药学系药理学与分子治疗学实验室. huangqr67@163.com
收稿日期: 2010-04-16
修回日期: 2010-06-19
接受日期: 2010-06-28
在线出版日期: 2010-07-28
Abstract

目的: 研究短发夹RNA(shRNA)真核表达载体在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中对IKKα基因表达的抑制作用.

方法: 设计3条靶向IKKα的shRNA, 经退火成互补双链, 克隆到质粒 pGPU6/GFP/Neo中构建重组载体, 经酶切鉴定和测序确认后, 将3个重组表达载体转染到HUVECs, 利用Western blot检测并筛选出抑制效果最好的重组表达载体.

结果: 通过酶切鉴定和测序分析, 靶向IKKα的3个pGPU6/GFP/Neo-shRNA重组载体构建成功, Western blot结果显示pGPU6/GFP/Neo-shRNA3可有效抑制高糖诱导HUVECs中IKKα基因的表达, 抑制率为70.6%.

结论: 靶向IKKα基因的shRNA真核表达载体构建成功, 且能有效抑制HUVECs中IKKα基因的表达.

Keywords: IKKα基因; 短发夹RNA; RNA干扰; 重组表达载体