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小鼠胰星状细胞的分离培养及鉴定
唐元瑜, 苏式兵, 上海中医药大学中医复杂系统研究中心 上海市 201203
唐元瑜, 医学博士, 现工作于福建中医学院中医基础理论内经教研室, 主要从事中医药防治器官纤维化研究.
基金项目: 上海市教委基金资助项目, No. 07ZZ51; 上海市教委E-研究院中医内科建设计划基金资助项目, No. E03008.
作者贡献分布: 本课题由唐元瑜与苏式兵合作设计; 整个实验研究过程及操作由唐元瑜独立完成; 论文由唐元瑜撰写; 审阅及修改由苏式兵完成.
通讯作者: 苏式兵, 教授, 201203, 上海市浦东新区蔡伦路1200号, 上海中医药大学中医复杂系统研究中心. shibingsu@yahoo.com
电话: 021-51322755
收稿日期: 2009-03-13
修回日期: 2009-05-15
接受日期: 2009-05-25
在线出版日期: 2010-01-08
修回日期: 2009-05-15
接受日期: 2009-05-25
在线出版日期: 2010-01-08
Abstract
目的: 建立简单易行的小鼠胰星状细胞(PSCs)原代培养方法, 为胰腺纤维化研究提供可靠的体外细胞模型.
方法: 采用植块法结合酶消化法进行培养, 即在无菌条件下取小鼠正常胰腺组织, 经过剪碎、胰蛋白酶消化后植入培养瓶中贴壁培养, 并予限制性条件培养基进行纯化, 通过倒置生物显微镜对传代前后所培养细胞进行形态学、自发荧光及油红染色脂滴的观察, 并结合细胞免疫化学和免疫荧光等方法来鉴定小鼠PSCs.
结果: 小鼠原代PSCs培养3-4 d后油红染色阳性, 并能观察到自发荧光现象; 传代后的细胞形态主要表现为体积较大, 伪足发达, 呈"星芒状"或"乌贼样"; 细胞免疫荧光染色和细胞免疫化学染色显示α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达阳性.
结论: 植块与酶消化结合法分离小鼠胰腺星状细胞, 简单实用、成功率高, 能够满足体外实验的要求.
Keywords: 胰星状细胞; 培养; 鉴定; 植块法